تحضير خلايا الأوعية الدموية لمقايسة سدادة جل مصفوفة الجسم الحي

ابدأ بإعداد وسط الثقافة البطانية الكامل باستخدام 460 ملليلتر من وسط الخلية البطانية ، وإضافة 50 ملليلتر من FBS ، وخمسة ملليلتر من البنسلين الستربتومايسين ، وخمسة ملليلتر من مكمل نمو الخلايا البطانية. يمكن تخزين الوسائط المعدة عند أربع درجات مئوية لمدة شهر. بعد ذلك ، في طبق زراعة الأنسجة 100 ملم يحتوي على 0.1 مليون خلية وعائية في ثمانية ملليلتر من وسط الثقافة البطانية الكامل المحضر وزراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون حتى يتم تحقيق 70٪ من الطلاقة.

بعد ذلك ، قم بإزالة وسط الاستزراع من الطبق وشطف الخلايا مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني للتخلص من الخلايا غير المرتبطة والحطام. بعد إزالة برنامج تلفزيوني ، أضف ثلاثة ملليلتر من 0.25٪ تربسين ، تحتوي على 2.21 ملليمولار EDTA إلى الخلايا واحتضان الطبق عند 37 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة. تحقق من انفصال الخلية تحت المجهر الضوئي عند تكبير 40 مرة.

تحييد التربسين مع سبعة ملليلتر من وسط الثقافة البطانية الكاملة وشطف الخلايا بلطف من طبق الاستزراع. جهاز الطرد المركزي تعليق الخلية بعد جمعها في أنبوب 15 ملليلتر في 400G لمدة 10 دقائق. أعد تعليق الخلايا في خمسة ملليلتر من وسط الثقافة البطانية الكامل بعد إزالة المادة الطافية ، ثم عد الخلايا باستخدام مقياس الدم الخلوي ، ونقل حجم محسوب من المعلق يحتوي على 2 مليون خلية إلى أنبوب معقم 1.5 ملليلتر.

قم بإذابة الخلايا عن طريق الطرد المركزي للتعليق عند 400 جرام لمدة خمس دقائق قبل إزالة المادة الطافية. الخلايا الوعائية جاهزة الآن للاختلاط مع هلام المصفوفة لمقايسة سدادة هلام المصفوفة.