للبدء ، حافظ على العقم عن طريق تنظيف القفازات والخراطيش وألواح الثقافة بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد ذلك ، قم بتشغيل الضاغط الخاص بالطابعة الحيوية وحدد الزر الذي تمت تهيئته لتهيئة الطابعة. امسح الأسطح الموجودة داخل الطابعة باستخدام 70٪ من الإيثانول.
باستخدام زر تشغيل الطباعة ، قم بتحميل ملف الطباعة وافتح بروتوكول الطباعة PDF. ذوبان الحبر الحيوي ، سوائل المنشط ، و 50 ملليلتر من الوسائط الكاملة في درجة حرارة الغرفة. قم بإعداد خرطوشة الطباعة وفقا للتعليمات الواردة في ملف PDF الخاص ببروتوكول الطباعة، مع ضمان الكميات الصحيحة من الكواشف في مقصورات محددة.
بعد ذلك ، أضف 1.2 ملليلتر من F3 إلى C1 ، و 1.2 ملليلتر من F32 إلى C2 ، و 200 ميكرولتر من F261 إلى C4. قم بإزالة لوحة البولي إيثيلينيمين والصفيحة المطلية باللامينين من الحاضنة. اضبط حجرة حامل اللوحة على لوحة منخفضة. أدخل اللوحة في حجرة حامل اللوحة اليمنى بالطابعة.
أخرج الغطاء من اللوحة وضعه في حامل الغطاء. ضع خرطوشة الطباعة في الطابعة الحيوية وحدد الزر Print Inert Base لبدء تشغيل الطباعة. بعد ذوبان الجليد ، يقوم جهاز الطرد المركزي بالخلايا العصبية والخلايا النجمية ، واستنشاق المادة الطافية وإعادة تعليق كلا النوعين من الخلايا بشكل منفصل في ملليلتر واحد من الوسائط الكاملة.
امزج 20 ميكرولترا من معلق الخلية بنفس الحجم من التريبان الأزرق وعد الخلايا لتحديد تركيز الخلية القابل للحياة لكل نوع من الخلايا. بعد ذلك ، اجمع بين 3 ملايين خلية عصبية جلوتاماترجية مع 1 مليون خلية نجمية في أنبوب سعة 15 ملليلتر ، وأضف وسائط كاملة لعمل حجم نهائي يبلغ ثمانية ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية ونضح الطافد دون إزعاج بيليه.
الحبيبات في 200 ميكرولتر من سائل المنشط F299 عن طريق السحب لأعلى ولأسفل. ضع الأغطية على الخرطوشة ولوحة الثقافة ، وقم بإزالتها من الطابعة الحيوية. في خزانة السلامة الحيوية ، أضف 200 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى البئر C3 من خرطوشة الطباعة.
أعد إدخال الخرطوشة في الطابعة الحيوية وقم بإزالة الغطاء كما هو موضح سابقا. ابدأ مرحلة نماذج الطباعة من تشغيل الطباعة. في الوقت نفسه ، استبدل الوسائط الخشبية من لوحة التحكم 2D بوسائط كاملة.
أدخل لوحة استهداف الطباعة الحيوية في الطابعة الحيوية وقم بإزالة الغطاء. ابدأ عملية استهداف الطباعة الحيوية. عند المطالبة ، قم بإزالة لوحة الاستهداف من الطابعة الحيوية.
استخدم الدليل لتحديد المواقع التي يمكن فيها ملاحظة القطرات على اللوحة. أعد إدخال لوحة الاستهداف في الطابعة الحيوية لتكرار عملية طباعة القطيرات وتحديدها. عند المطالبة ، استبدل لوحة الاستهداف بلوحة زراعة الخلية.
بعد الطباعة ، أضف وسائط كاملة إلى جميع آبار الزراعة المشتركة ثلاثية الأبعاد ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. أخيرا ، تخلص من الخراطيش والسوائل المتبقية. وفقا لبروتوكولات المختبر.
بعد سبعة أيام من الطباعة ، لم تبق أي خلايا مفردة تقريبا وظهرت حزم مترابطة من الخلايا العصبية والإسقاطات النجمية محصنة. زاد نمو الخلايا العصبية خطيا بين 12 إلى 156 ساعة. أثناء نمو الخلايا العصبية ، زاد حجم مجموعات أجسام الخلايا أيضا.
أظهر تحليل صلاحية الخلية أن ما يقرب من 72٪ من إجمالي الخلايا كانت حية في اليوم الرابع بينما مات 29٪. أكد التلوين المناعي مورفولوجيا الخلايا السليمة للخلايا العصبية والخلايا النجمية المطبوعة بيولوجيا مع كلا النوعين من الخلايا التي تظهر نتوءات خلوية. تم تأكيد النمط الظاهري glutamatergic للخلايا العصبية من خلال التلوين المناعي لمستقبلات الغلوتامات 2.
