Mouse Leptomeninges Dissociation and Enzymatic Digestion for Efficient Culturing of Leptomeningeal Cells

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

304 Views

•

01:52 min

•

September 8th, 2023

DOI :

10.3791/200634-v

September 8th, 2023

•

Hong-Ji Deng¹, Kun Wu², Han-Fu Yu¹, Yong-Jin Zhang¹^,³, Yun-Cong Li¹, Chong Li¹, Fei Wang¹

¹Department of Neurosurgery, The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, ²Department of Clinical Laboratory, The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, ³Clinical Medical Research Center, The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University

Transcript

للبدء ، قم بشق جلد الفأر الذي تم التضحية به بعناية ، بدءا من فتحة الجمجمة وتمتد نحو المنطقة الأمامية. باستخدام المقص ، ارفع الجمجمة وأزلها بدقة دون الإضرار ب leptomeninges ، وجمع الدماغ بأكمله. اغمر الدماغ بالكامل في مخزن الغسيل ، واغسله برفق لإزالة الدم السطحي.

نقل الدماغ إلى طبق بتري معقم دون تقطيع. ثم ، تحت المجهر ، استخدم ملاقط دقيقة لاستخراج leptomeninges من سطح الدماغ. باستخدام مقص مجهري معقم ، قم بقطع أنسجة leptomeninges إلى شظايا.

إصلاح مزيج الانزيم الهضمي باستخدام المكونات المحددة. أضف 10 ملليلتر من المزيج إلى الشظايا واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. حرك برفق لفصل الشظايا من أسفل الأنبوب.

ثم أضف 10 ملليلتر من المخزن المؤقت للتوقف. أجهزة الطرد المركزي التعليق عند 300 غرام لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية. وباستخدام ماصة ، قم بإزالة المادة الطافية بعناية.

أضف 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني بارد ، وقم بتصفية أي كتل من خلال مصفاة 70 ميكرون في أنبوب معقم سعة 50 ملليلتر. صفيحة 10 إلى الخلايا الخامسة لكل سنتيمتر مربع في قارورة T25 مغلفة بالفبرونيكتين مع خمسة ملليلتر من وسط الاستزراع ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة. بعد الحضانة ، استبدل الوسط بوسط جديد للتخلص من الخلايا غير المرفقة.

Explore More Videos

From the series