للبدء ، احتضان بيض الدجاج المخصب في حاضنة رطبة عند 38 درجة مئوية. الآن تشريح المرحلة 30 إلى 33 الجلود الظهرية لجنين الدجاج في HBSS. ثم احتضان الجلود مرتين في محلول ملحي خال من الكالسيوم والمغنيسيوم مع 0.25٪ EDTA لمدة 15 إلى 20 دقيقة.
افصل بعناية الظهارة واللحمة المتوسطة باستخدام ملقط صانع الساعات وانقل المادة المنفصلة إلى HBSS ، الموضوعة على الجليد. اجمع اللحمة المتوسطة المنفصلة في أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر وأضف ملليلتر من 0.1٪ كولاجيناز تربسين مصنوع في برنامج تلفزيوني. ثم احتضان الحل في حمام مائي.
بعد ذلك ، استخدم ماصة باستور لتفريق اللحمة المتوسطة للجلد في معلق خلية واحدة. ثم أضف ثمانية ملليلتر من DMEM تحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني لوقف الهضم. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 233G لمدة خمس دقائق.
ثم أعد تعليق الحبيبات في وسط الثقافة. بعد ذلك ، ضع ملحق زراعة الخلايا في بئر من طبق من ستة آبار ، وقم بإسقاط قطرة 10 ميكرولتر من خلايا اللحمة المتوسطة على الإدخال. في البئر خارج الملحق ، ماصة ملليلتر من DMEM مع 10 ٪ مصل بقري الجنين.
احتضان الخلايا المطلية عند 37 درجة في حاضنة تحتوي على 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 95٪ هواء لمدة ساعة واحدة. باستخدام ماصة ملليلتر واحد ، انقل الظهارة السليمة أعلى قطرة اللحمة المتوسطة المطلية. قم بتسطيح الظهارة السليمة فوق اللحمة المتوسطة لتشكيل نبات الجلد المعاد تشكيله.
اترك طبقة رقيقة من الوسط على الملحق للحفاظ على الجلد شبه مبلل. توفير واجهة الهواء / السائل احتضان نبتة الجلد المعاد تشكيلها عند 37 درجة في حاضنة تحتوي على 5٪ من ثاني أكسيد الكربون و 95٪ من بيئة الهواء. تبدو مزارع الأعضاء خارج الجسم الحي متجانسة في براعم الريش القصيرة التي تشكلت بعد يومين إلى ثلاثة أيام في الاستزراع وبراعم الريش الطويلة التي تشكلت بعد أربعة إلى خمسة أيام في الثقافة.
