ابدأ تخفيف عينة الأمصال البشرية بخلط خمسة ميكرولترات من عينة المصل مع 120 ميكرولترا من محلول الفحص في لوحة 96 بئرا. تمييع إلى ثمانية أضعاف إضافية عن طريق خلط 10 ميكرولتر من التخفيف الأولي مع 70 ميكرولتر من المخزن المؤقت للفحص. والآن، حضري 100 ميكرولتر من خليط الخرز الذي يحتوي على حبات مستهدفة مقترنة بمولد الضد.
بعد ذلك ، قم بتخفيف مزيج الخرزة المحضر في 2.4 مل من المخزن المؤقت للفحص في أنبوب فالكون. ابدأ حضانة المصل عن طريق سحب 25 ميكرولترا من معلق الخرزة في الآبار المخصصة. أضف 25 ميكرولترا من المصل المخفف 200 ضعف إلى الآبار مع تعليق الخرزة.
قم بتغطية لوحة التفاعل المكونة من 96 بئرا بختم صفيحة دقيقة. ثم احتضان اللوحة مع الخرز على شاكر لوحة. بعد الحضانة ، قم بإزالة لوحة تفاعل 96 بئرا من شاكر اللوحة.
ضع اللوحة في غسالة الألواح المغناطيسية ، وانزع ختم اللوحة اللاصقة. بعد ذلك ، اغسل الخرز ثلاث مرات باستخدام 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت للغسيل ، ثم قم بشفط حجم الغسيل النهائي من الخرز بعد خطوة الغسيل الأخيرة. بالنسبة لأول حضانة للأجسام المضادة ، ابدأ بإعداد خليط كاشف الكشف المزدوج IgG و IgM جديد في مخزن المقايسة.
ماصة 30 ميكرولتر من كاشف الكشف في كل بئر معين ، ثم قم بتغطية لوحة تفاعل 96 بئرا بختم صفيحة دقيقة. احتضان اللوحة على شاكر لوحة لمدة 45 دقيقة عند 20 درجة مئوية عند 750 دورة في الدقيقة. بعد الحضانة ، ضع اللوحة في غسالة الألواح المغناطيسية ، وقم بإزالة ماصة ختم اللوحة اللاصقة 30 ميكرولتر من التعري المخفف المسمى BV421 في كل تفاعل جيدا بعد غسل الألواح كما كان من قبل.
ثم ضع اللوحة المختومة على شاكر لوحة للحضانة اللاحقة. بمجرد اكتمال الحضانة ، اغسل اللوحة ، وأعد تعليق الخرز داخل الآبار إلى حجم نهائي يبلغ 100 ميكرولتر باستخدام المخزن المؤقت للغسيل. لتحليل النتائج ، قم بتغطية لوحة التفاعل المكونة من 96 بئرا بختم صفيحة دقيقة.
بعد ذلك ، احتضان اللوحة المغطاة لمدة ثلاث دقائق عند 20 درجة مئوية عند 1000 دورة في الدقيقة على شاكر الصفيحة. انقل اللوحة من الخلاط إلى أداة محلل تدفق المراسل المزدوج. أخيرا ، قم بتقييم متوسط شدة الفلورسنت للعينة ، أو MFI ، باتباع تعليمات الشركة المصنعة.
أظهر تحليل ارتباط سبيرمان لثلاثة مستضدات بوريليا تمثيلية استنساخا موحدا لقيم MFI عند اكتشاف الأجسام المضادة المضادة للبوريليا الموجودة في الأمصال البشرية. أظهر فحص المراسل المزدوج قابلية جيدة للتكرار من الفحص إلى الفحص مع دقة عالية بين المقايسة أظهرتها مخططات ليفي جينينغز. عند تخفيفات العينات من 100 ضعف إلى 12،800 ضعف ، كانت منحنيات التخفيف لكل من اكتشاف IgM واكتشاف IgG متشابهة لكلا الجهازين.
كانت قيم MFI أعلى قليلا في أداة المراسل الفردي.
