Preparing Cells to Assemble a 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

116 Views

•

02:05 min

•

October 20th, 2023

DOI :

10.3791/200667-v

October 20th, 2023

•

Camille Goldman*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Natalie Suhy*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Jessica E. Schwarz¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Emily Ruth Sartori¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Rikki B. Rooklin¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Braxton R. Schuldt¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Louise A. Mesentier-Louro¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Joel W. Blanchard¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Icahn School of Medicine at Mount Sinai, ²Black Family Stem Cell Institute at Mount Sinai, ³Ronald M. Loeb Center for Alzheimer’s Disease at Mount Sinai, ⁴Friedman Brain Institute at Mount Sinai, ⁵Nash Family Department of Neuroscience at Mount Sinai

* These authors contributed equally

Transcript

ابدأ بإعداد الخلايا البطانية المتمايزة والطفيليات والخلايا النجمية لتجميع نموذج iBBB. بعد استنشاق وسط زراعة الخلايا من الخلايا البطانية المتمايزة ، اغسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني مرة واحدة ، ثم أضف خليط كولاجيناز البروتياز إلى الخلايا المغسولة وافصل الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. انقل مزيج كولاجيناز البروتياز مع الخلايا المنفصلة إلى أنبوب مخروطي يحتوي على hECSR ، مع الحفاظ على نسبة 1: 3 من المزيج إلى hECSR ، ثم طرد الخلايا عند 300 جم لمدة ثلاث دقائق واستنشاق المادة الطافية قبل تعليق حبيبات الخلية الناتجة في hECSR.

فصل الطفيليات المتمايزة مع خليط كولاجيناز البروتياز عند 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق. أضف الكمية المناسبة من N2B27 في أنبوب مخروطي وانقل الخلايا المنفصلة في مزيج كولاجيناز البروتياز إليه ، مع الحفاظ على نسبة 1: 3 من المزيج إلى N2B27. تدور الخلايا في 300 غرام لمدة ثلاث دقائق.

بعد استنشاق المادة الطافية ، أعد تعليق حبيبات الخلية في N2B27. افصل الخلايا النجمية المتمايزة بخليط كولاجيناز البروتياز عند 37 درجة سلزية لمدة خمس دقائق. نقل الخلايا المنفصلة في مزيج كولاجيناز البروتياز إلى أنبوب مخروطي يحتوي على وسط نجمي كامل بنسبة 1: 3 من المزيج إلى الوسط.

بعد الطرد المركزي للخلايا عند 300 جرام لمدة ثلاث دقائق ، قم باستنشاق المادة الطافية وإعادة تعليق حبيبات الخلية في وسط نجمي كامل. الخلايا جاهزة الآن لتجميع iBBB.

Explore More Videos

3D Human stem cell derived

In Vitro Blood Brain Barrier

Differentiated Endothelial Cells

Protease Collagenase Dissociation

HECSR

Differentiated Parasites

N2B27

Differentiated Astrocytes

Complete Astrocyte Medium

IBBB Assembly

From the series