قم بتجميع الحاجز الدموي الدماغي المشتق من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات ، أو iBBB ، باستخدام الخلايا البطانية المنفصلة والطفيليات والخلايا النجمية ، اجمع بين الأنواع الثلاثة من الخلايا في أنبوب مخروطي مع تضمين 10٪ أكثر من العدد المحسوب للخلايا لحساب أخطاء الماصة. تدور أسفل خليط الخلية في 300 غرام لمدة ثلاث دقائق. نضح الطافع ، وترك بيليه الخلية مع ما يقرب من 50 ميكرولتر من الوسط.
باستخدام ماصة P200 ، أعد تعليق حبيبات الخلية برفق في الوسط المتبقي لإنشاء ملاط خلية واحدة. ضع الأنبوب الذي يحتوي على ملاط الخلية الناتج على الثلج وأضف كمية كافية من مصفوفة غشاء القاعد GF المختزلة إليه لكل العدد المطلوب من iBBBs. امزج الخلايا بشكل متجانس مع عدم إدخال أي فقاعات هواء.
ماصة 50 ميكرولتر من خليط مصفوفة الخلية الناتجة في بئر من طبق استزراع زجاجي 48 بئر أو 96 بئرا وتوزيعه بالتساوي في جميع أنحاء قاع الطبق. احتضن الطبق على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 إلى 40 دقيقة لبلمرة المصفوفة أثناء تغليف الخلايا. أخيرا ، أضف 500 ميكرولتر من وسط الخلايا النجمية المكمل إلى البئر وحافظ على iBBBs في الثقافة.
بالنسبة للوحة 96 بئرا ، أضف 100 إلى 150 ميكرولترا من الوسط إلى البئر حتى يتم تطويرها بشكل كاف لفحوصات المصب ، والتي تستغرق عادة أسبوعين. ظهر iBBB المشكل بشكل صحيح كقرص صلب أحادي شفاف تحت مجهر برايتفيلد. بعد 24 ساعة ، تم تحديد خلايا مفردة موزعة بالتساوي.
بعد أسبوعين ، كانت الهياكل الأكثر تميزا ، على الرغم من صعوبة تحديدها ، مرئية.