Constructing the 3D Human-Stem-Cell-Derived In Vitro Blood Brain Barrier

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

119 Views

•

02:08 min

•

October 20th, 2023

DOI :

10.3791/200668-v

October 20th, 2023

•

Camille Goldman*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Natalie Suhy*¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Jessica E. Schwarz¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Emily Ruth Sartori¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Rikki B. Rooklin¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Braxton R. Schuldt¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Louise A. Mesentier-Louro¹^,²^,³^,⁴^,⁵, Joel W. Blanchard¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Icahn School of Medicine at Mount Sinai, ²Black Family Stem Cell Institute at Mount Sinai, ³Ronald M. Loeb Center for Alzheimer’s Disease at Mount Sinai, ⁴Friedman Brain Institute at Mount Sinai, ⁵Nash Family Department of Neuroscience at Mount Sinai

* These authors contributed equally

Transcript

قم بتجميع الحاجز الدموي الدماغي المشتق من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات ، أو iBBB ، باستخدام الخلايا البطانية المنفصلة والطفيليات والخلايا النجمية ، اجمع بين الأنواع الثلاثة من الخلايا في أنبوب مخروطي مع تضمين 10٪ أكثر من العدد المحسوب للخلايا لحساب أخطاء الماصة. تدور أسفل خليط الخلية في 300 غرام لمدة ثلاث دقائق. نضح الطافع ، وترك بيليه الخلية مع ما يقرب من 50 ميكرولتر من الوسط.

باستخدام ماصة P200 ، أعد تعليق حبيبات الخلية برفق في الوسط المتبقي لإنشاء ملاط خلية واحدة. ضع الأنبوب الذي يحتوي على ملاط الخلية الناتج على الثلج وأضف كمية كافية من مصفوفة غشاء القاعد GF المختزلة إليه لكل العدد المطلوب من iBBBs. امزج الخلايا بشكل متجانس مع عدم إدخال أي فقاعات هواء.

ماصة 50 ميكرولتر من خليط مصفوفة الخلية الناتجة في بئر من طبق استزراع زجاجي 48 بئر أو 96 بئرا وتوزيعه بالتساوي في جميع أنحاء قاع الطبق. احتضن الطبق على حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 إلى 40 دقيقة لبلمرة المصفوفة أثناء تغليف الخلايا. أخيرا ، أضف 500 ميكرولتر من وسط الخلايا النجمية المكمل إلى البئر وحافظ على iBBBs في الثقافة.

بالنسبة للوحة 96 بئرا ، أضف 100 إلى 150 ميكرولترا من الوسط إلى البئر حتى يتم تطويرها بشكل كاف لفحوصات المصب ، والتي تستغرق عادة أسبوعين. ظهر iBBB المشكل بشكل صحيح كقرص صلب أحادي شفاف تحت مجهر برايتفيلد. بعد 24 ساعة ، تم تحديد خلايا مفردة موزعة بالتساوي.

بعد أسبوعين ، كانت الهياكل الأكثر تميزا ، على الرغم من صعوبة تحديدها ، مرئية.

Explore More Videos

3D Human stem cell derived

In Vitro Blood brain Barrier

IBBB

Dissociated Endothelial Cells

Reduced GF Basement Membrane Matrix

Cell Matrix Mixture