للبدء ، خذ فأرا مخدرا وضع قطرة واحدة من 1٪ تروبيكاميد و 2.5٪ فينيليفرين في العين لتوسيع حدقة العين. ثم ضع جل العيون على القرنية لمنع الجفاف وإعتام عدسة العين الناجم عن التخدير. بعد ذلك ، قم بإعداد مجهر تشغيل مستقيم مع مسار ضوء مباشر في بيئة معقمة لإجراء الحقن تحت الشبكية.
لتحضير المحقنة الزجاجية سعة 10 ميكرولتر ، افصل محور الإبرة وأرفق الإبرة الحادة ذات المقياس 33. خذ غطاء المحور المعدني واربط الإبرة بإحكام على المحقنة. اغسل الإبرة بالماء المقطر لاختبار التسرب وسالكية الإبرة.
ثم أفرغ المحقنة وضعها جانبا بعناية. بعد ذلك ، ضع الماوس المخدر على وسادة ووجه عين العلاج نحو هدف المجهر. ضع 0.5٪ بروباراكايين هيدروكلوريد وانتظر لمدة 30 ثانية.
ثم ضع 150 ميكرولتر من جل العيون على العين وألصق زلة غطاء مستديرة. قم بإجراء فحص أولي للعين مع ملاحظة القرنية والقزحية والبؤبؤ والعدسة والملتحمة. اضبط المستوى البؤري لتصور قاع عين الماوس من خلال التلميذ.
ثم قم بمحاذاة الرأس بحيث يحاذي الرأس البصري مركز التلميذ. بعد ذلك ، انقر فوق قاعدة الأنبوب الذي يحتوي على أسلاف مستقبلات ضوئية مشتقة من HESC للحصول على تعليق خلية موحد. باستخدام حقنة زجاجية ميكرولتر سعة 10 ميكرولتر مع إبرة حادة قياس 33 ، ارسم ميكرولتر من خليط الخلايا.
استخدم إبرة يمكن التخلص منها بقياس 30 لإنشاء جرح استئصال الصلبة الموضوعة على بعد مليمترين خلف الليموزين. حافظ على زاوية الإبرة عند حوالي 45 درجة لمنع ملامسة العدسة. بمجرد أن يصبح طرف الإبرة مرئيا داخل العين ، اسحب الإبرة بعناية.
تخلص من الإبرة المستخدمة في سلة مهملات حادة لمنع إصابات وخز الإبرة. الآن خذ المحقنة الزجاجية وأدخل الإبرة الحادة في جرح استئصال الصلبة. تقدم الإبرة الحادة دون لمس العدسة حتى تصل إلى الشبكية المقابلة لجرح الدخول.
اخترق الشبكية برفق حتى يظهر فرع ضغط على الصلبة. ثم قم بحقن ميكرولتر من تعليق الخلية أو وسائط PRDM في الفضاء تحت الشبكية مع الحفاظ على الضغط اللطيف على المحقنة. يشير تكوين فقاعة مرئية إلى الحقن الناجح.
انتظر 10 ثوان للسماح للخلايا بالاستقرار. اسحب الإبرة برفق من العين. لتصور الفقاعة ، حرك رأس الماوس لوضع العين تحت المجهر وتأمين الموضع عن طريق إمساك الرأس برفق.
بالنسبة إلى OCT أثناء العملية ، استخدم وظيفة IOCT على مجهر التشغيل وحدد cube على شاشة OCT. ضع منطقة المسح الضوئي على الفقاعة بالضغط على أزرار الأسهم. لضبط OCT وتوسيط الشريحة والتركيز للحصول على أفضل جودة OCT ، اضغط على التقاط أو مسح ضوئي للحصول على مسح OCT لمنطقة الفقاعة ومراجعة الصور للتحقق من جودة عمليات المسح.
أخيرا ، قم بإزالة زلة الغطاء ونظف الجل برفق من العين باستخدام الشاش. تطبيق مرهم مضاد حيوي مرة واحدة بعد الحقن لمنع العدوى. كشف فحص OCT عن كيانات HESC مميزة معلقة في العين المعالجة بالخلية.
في المقابل ، أظهرت العين المعالجة بالوسائط سائلا غير غائم ، خاليا من الخلايا داخل الفضاء تحت الشبكية.
