للبدء ، أضف 30 جراما من كلوريد الصوديوم في ستة لترات من الماء منزوع الأيونات في خزان سائل غمد وهز الخزان لإذابة الملح. ثم قم بتوصيل الخزان بفارز الخلايا. قم بتشغيل فارز الخلايا ، وابدأ تشغيل النظام السائل ، وانتظر حتى تتوازن الموائع.
إعداد تأخير الإسقاط. لتحضير محلول مخزون مستخلص الخميرة ، أعد تعليق حصة واحدة من مستخلص خميرة الكربون 13 في 7.5 ملليلتر من الماء عالي النقاء و 2.5 ملليلتر من الميثانول. ثم ، لتحضير المخزن المؤقت للاستخراج ، أضف 10 ميكرولتر من محلول مخزون مستخلص خميرة الكربون 13 إلى 10 ملليلتر من الأسيتونيتريل واخلطه جيدا.
أضف 25 ميكرولترا من المخزن المؤقت للاستخراج إلى كل بئر من لوحة PCR المكونة من 96 بئرا وقم بتغطية الآبار بغطاء. ضع اللوحة على فارز الخلايا لجمع الخلايا التي تم فرزها. قم بفرز 5000 حدث لكل من مجموعات Alexa Fluor 647 الإيجابية والسلبية PE في الآبار الأربعة الأولى.
بعد ذلك ، قم بفرز 5000 حدث لكل من السكان الموجبة PE و Alexa Fluor 647 في الآبار الأربعة التالية. بعد ذلك ، بالنسبة للخلايا الجذعية المكونة للدم ، قم بفرز 5000 حدث من انخفاض PE-Cy7 ، وإيجابية PE ، وإيجابية APC-Cy7 ، و Brilliant Violet 605 إيجابية ، و Brilliant Violet 421 سلبية في البئر الأول ، متبوعا بفرز 5000 حدث من PE-Cy7 المنخفض ، PE الإيجابي ، APC-Cy7 الإيجابي ، البنفسجي اللامع 421 الإيجابي ، والسكان السالب البنفسجي اللامع 605 في البئر التالي. بالنسبة لعينات الحطام، حدد أحداثا صغيرة جدا بحيث لا تمثل الخلايا السليمة بناء على إشارات التشتت الأمامية والجانبية .
بعد ذلك ، قم بتشغيل أداة LC-MS. ضع لوحة العينة في جهاز أخذ العينات التلقائي للأداة. افتح البرنامج المتوافق مع LC-MS وقم بإعداد الأداة للتحليل.
قم بتشغيل ما لا يقل عن أربع عينات فارغة أو مجمعة للعملية لموازنة العمود ومزيج اختبار LC للتحقق من الأداء الكروماتوغرافي. تأكد من أن الضغط الخلفي الأولي والحد الأقصى أقل من 150 و 400 بار على التوالي. بعد ذلك ، تأكد من أن أوقات الاحتفاظ تقع في غضون دقيقة واحدة.
بعد ذلك ، تحقق من أن الوادي بين الليوسين والإيزوليوسين في الانتقال الإيجابي 132 إلى 86 أقل من 20٪ من ارتفاع الذروة. أخيرا ، تأكد من أن الفرق في وقت الاحتفاظ AMP إلى ADP هو 1.5 إلى 1.9 دقيقة و ADP إلى ATP هو 1.1 إلى 1.5 دقيقة. بعد تأكيد المعلمات التجريبية ، قم بإعداد تشغيل مع عملية فارغة أو عينة تجمع لتقليل الترحيل من مزيج اختبار LC ، متبوعا بعينات الاختبار بترتيب عشوائي.
يتيح فرز FACS عزل المجموعات النقية من أنواع الخلايا المختلفة من نفس تعليق الخلية. تم الحفاظ على الاختلافات الأيضية بين أنواع الخلايا من نفس النسيج باستخدام بروتوكول CMS لخلية FACS للخلايا الجذعية المكونة للدم والخلايا السلفية متعددة القدرات. كانت هناك حاجة إلى خلايا من ستة فئران لتوليد ست عينات ، مما أدى إلى تباين أكبر داخل كل مجموعة مقارنة بالخلايا البائية والتائية ، والتي تم فرزها من نفس طحال الفئران.
تم فصل عينات الحطام التي تمثل عينات التحكم الفارغة للعملية بوضوح عن العينات التي تحتوي على مستخلصات الخلايا. تظهر هنا خريطة حرارية توضح معلومات عن المستويات النسبية للمستقلبات عبر أنواع الخلايا المختلفة.
