لتحضير آبار الاستزراع ، ضع علامة على غطاء لوحة 24 بئرا برمز المتبرع A أو B والتاريخ والجرعة. قم بإزالة قوارير التبريد التي تحتوي على دم بشري من النيتروجين السائل وقم بإذابتها جزئيا في حمام الماء الدافئ حتى تظهر بلورات ثلجية صغيرة. بعد ذلك ، في غطاء التدفق الصفحي ، افتح القارورة بعناية لمنع فقاعات الهواء من الانسكاب داخل الأنبوب.
إعادة تعليق ونقل محتويات القارورة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلتر. أثناء تحريك الأنبوب برفق ، بالتنقيط ، أضف ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني مسخن مسبقا. استخدم ماصة P-1000 لخلط PBS والدم.
للتخفيف والغسيل المنتظم ، أضف سبعة ملليلتر من برنامج تلفزيوني مسخن مسبقا إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر واخلطه عن طريق الماصة. أجهزة الطرد المركزي الدم في 180 غرام لمدة ثماني دقائق. في هذه الأثناء ، املأ الآبار غير المصنفة للوحة 24 بئرا ب 500 ميكرولتر من PBS وقم بتسخين اللوحة مسبقا عند 37 درجة مئوية.
بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة المادة الطافية بعناية ، تاركا ما يقرب من ملليلتر واحد في الأنبوب دون إزعاج اللوحة. باستخدام ماصة ، أعد تعليق اللوحة في المادة الطافية المتبقية. ثم أضف تدريجيا ثمانية ملليلتر من برنامج تلفزيوني دافئ في الأنبوب كما هو موضح سابقا.
أجهزة الطرد المركزي الدم المعلق. في غضون ذلك ، أضف 200 ميكرولتر من وسط زراعة RPMI إلى الآبار المحددة وقم بتسخين اللوحة مسبقا كما هو موضح. بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة المادة الطافية ، تاركا حوالي 80 ميكرولتر من المادة الطافية.
ثم أضف 280 ميكرولتر من مصل عجل الجنين وأعد تعليق اللوحة. نقل 180 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى الآبار المحددة. احتضان اللوحة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
