عزل الحويصلات الصغيرة خارج الخلية المشتقة من المشيمة البشرية النورموكسيكية ونقص الأكسجين للحقن في الفئران

لبدء استخراج النباتات من عينة المشيمة البشرية ، باستخدام ملقط معقم ، قم بإزالة الجلطات بعناية من الصفيحة القاعدية للمشيمة. استخراج النباتات الصغيرة حتى يتم الحصول على استخراج الأنسجة النهائية من حوالي 10 غرامات. بعد غسل النباتات وتعليقها في وسائط الاستزراع ، قسم النباتات المعاد تعليقها إلى طبقين استزراع 100 ملم.

ضع أحد الأطباق في ظروف قياسية عند 37 درجة مئوية مع 8٪ أكسجين و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. ضع الطبق الآخر في غرفة نقص الأكسجين مع 1 ٪ من الأكسجين. بعد زراعة النباتات في ظل ظرفين مختلفين لمدة 18 ساعة ، تابع حصاد الوسائط المكيفة للنباتات في أنبوب سعة 15 ملليلتر.

جمع وسائط الثقافة من الثقافات explant normoxic ونقص الأكسجين في أنابيب منفصلة. إجراء الطرد المركزي المتسلسل للوسط المكيف المحصود في درجة حرارة الغرفة. بعد كل طرد مركزي ، باستخدام ماصة من 20 إلى 100 ميكرولتر ، قم بجمع المادة الطافية بعناية أثناء التخلص من الحبيبات.

قم بإجراء طرد مركزي إضافي واحد على آخر طاف تم جمعه. أعد تعليق الحبيبات التي تم الحصول عليها والتي تحتوي على المشيمة ، أو الحويصلات الصغيرة خارج الخلية ، أو SEVs ، في 500 ميكرولتر من PBS ، وقم بتمرير التعليق من خلال مرشح 0.22 ميكرون. SEVs المشتقة من المشيمة جاهزة الآن للحقن في الفأر.