حقن الحويصلات الصغيرة خارج الخلية المشتقة من المشيمة البشرية في الفئران لدراسة اضطراب BBB

لإجراء حويصلات صغيرة خارج الخلية أو حقن SEVs في الماوس ، استخدم SEVs المعزولة من نباتات المشيمة البشرية ، المزروعة في ظل ظروف نقص الأكسجين والنورموكسيك. تمييع 200 ميكروغرام من SEVs المشيمة في العازلة الفوسفات عند درجة الحموضة 7.4 ، حتى الحجم النهائي من 70 ميكرولتر. قبل الحقن ، قم بتقييم رفاهية باستخدام مقياس RMCBS.

ثم ، باستخدام حقنة الأنسولين بإبرة قياس 30 ، قم بحقن المحلول في الوريد الوداجي الخارجي للفأر المخدر بشكل صحيح. بعد الحقن ، ضع ضغطا خفيفا على المنطقة المحقونة لمدة 15 ثانية باستخدام قطعة قطن جافة. قم بتقييم رفاهية الماوس باستخدام مقياس RMCBS في ثلاث وست و 12 و 24 ساعة بعد الحقن.

لتحليل تسرب إيفانز الأزرق ، قم بإعداد محلول صبغة إيفانز الأزرق بنسبة 2٪ في برنامج تلفزيوني. بعد 24 ساعة من حقن SEVs باستخدام الوصول المداري الرجعي ، قم بحقن محلول Evans الأزرق في الفأر المخدر بشكل صحيح. بمجرد تداول Evans blue في جسم ، قم بإجراء نضح داخل القلب على الفأر المخدر بحوالي ثلاثة ملليلتر من المحلول الملحي لإزالة الصبغة من الدورة الدموية.

بعد تثبيت الماوس بالتسريب داخل القلب بنسبة 4٪ بارافورمالدهيد في BBS واستخراج الدماغ بعناية ، قم بوزنه وتصويره. باتباع الإجراء الموضح ، استخرج أدمغة في كل مجموعة. باستخدام مجهر التكبير الاستريو ، تصور الصور الملتقطة لشرائح الدماغ المشرحة.

استخدم الصور الملتقطة لقياس تسرب إيفانز الأزرق باستخدام برنامج ImageJ. على عكس الفئران المحقونة ب SEVs من المشيمة المعيارية ، أظهرت الفئران المحقونة ب SEVs من المشيمة ناقص الأكسجين انخفاضا تدريجيا في النتيجة العصبية حتى 24 ساعة بعد الحقن. كان لدى أدمغة الفئران المحقونة ب SEVs من المشيمة التي تعاني من نقص الأكسجين تسرب أزرق أعلى من أدمغة المحقونة ب SEVs من المشيمة المعيارية.

أظهرت أدمغة الفئران المحقونة ب SEVs من المشيمة التي تعاني من نقص الأكسجين كميات منخفضة من بروتين CLDN5 ، وهو أمر بالغ الأهمية لضيق الحاجز الدموي الدماغي. أشارت كل هذه النتائج إلى اضطراب الحاجز الدموي الدماغي الذي أدخلته SEVs من المشيمة التي تعاني من نقص الأكسجين.