Calcium Imaging of Drosophila Ex Vivo Brain for Epileptiform Analysis

للبدء ، قم بتغذية المحلول الخارجي بمحلول ملحي مؤكسج لمدة خمس دقائق. باستخدام ماصة ، انقل 10 ميكرولتر من محلول التشريح إلى طبق بتري. الآن ، استخدم إبر المحاقن والمجهر لتشريح أدمغة النوع البري المخدر والذباب بالضربة القاضية بعناية.

باستخدام ماصة ، انقل الدماغ المحضر إلى طبق تسجيل به خمسة ملليلتر من المحلول الخارجي. شل حركة العقول مع حامل C حاد. بعد ذلك ، التقط الصورة متحدة البؤر لكل دماغ بمعدل 20x.

استخدم وضع المسح الضوئي XYT وحدد الخلايا العصبية لجسم الفطر بتضخيم رقمي إضافي 4.5 مرة. اضبط إثارة الليزر على 488 نانومتر بقوة ليزر 16 ميكرو واط للحصول على انبعاث GCaMP6m للدماغ بالكامل. ثم اضبط معلمات المسح على سرعة 1400 بحجم بكسل 256 × 256 بكسل.

اضبط معدل الاستحواذ على 5.3 هرتز وسجل لمدة ثلاث دقائق. تحليل مضان من خمس إلى ثماني مناطق ذات أهمية. تحديد جسم الخلية من الخلايا العصبية جسم الفطر يدويا كمنطقة الاهتمام.

استخدم الصورة J لتسمية الخلايا العصبية المحددة وقياس شدة مضانها. تحليل البيانات الفلورية ل GCaMP6m كما هو موضح. حدد التألق داخل الخلايا الذي يزداد بين انحرافين معياريين و 2.5 على أنه طفرات صغيرة وتلك التي تزيد أكثر من 2.5 انحراف معياري على أنها طفرات كبيرة.

لوحظت إشارات الكالسيوم في جسم فطر الذباب. أظهر ذباب ضربة قاضية CAC طفرات كبيرة أكثر من المسامير الصغيرة.