للبدء ، خذ حلقة تلقيح لاختيار مستعمرة وحيدة النسيلة من المبيضات البيض من لوحة YPD. نقل المستعمرة إلى خمسة ملليلتر من الوسط السائل YPD ، تستكمل مع 50 ميكروغرام لكل ملليلتر من كاربينيسيلين. هز الخلايا بسرعة ثابتة تبلغ 220 دورة في الدقيقة عند 30 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
ثم الطرد المركزي تعليق الخلية في 400g لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الخلايا في محلول ملحي طبيعي واضبط تركيز الخلية عن طريق مطابقة تعكر تعليق الخلية مع معيار 0.5 McFarland. لإنشاء محلول ملحي طبيعي بنسبة 0.9٪ ، قم بوزن 0.9 جرام من كلوريد الصوديوم وقم بحله في 100 مل من الماء منزوع الأيونات.
بعد ذلك ، الأوتوكلاف الأدوات الجراحية في سلك سبائك التيتانيوم والنيكل عند 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة قبل الاستخدام. ثم قسم عشوائيا 30 ذكرا من الفئران C57BL / 6 إلى غرسة فارغة ومجموعة PJI. بعد تخدير الفئران ، قم بإزالة الشعر من الطرف الخلفي الأيسر واستخدم اليود لتطهير المنطقة المحلوقة.
تحقق من عمق التخدير من خلال مراقبة فقدان رد الفعل الصحيح. بالنسبة للفئران في المجموعة الضابطة ، لا يتم تطبيق أي علاج. بالنسبة للفئران في الغرسة الفارغة ومجموعة PJI ، استخدم شفرة رقم 10 لإنشاء شق طولي بخمسة ملليمترات على ركبة الطرف الخلفي الأيسر لكشف المفاصل لمزيد من الإجراءات.
الآن ، أدخل إبرة حقنة معقمة لإنشاء ثقب بطول خمسة ملليمترات في القناة داخل الفخذ داخل النخاع. أدخل بعناية سلك سبائك النيكل والتيتانيوم في الفتحة قبل قطعه بالمقص. ثم قم بإعطاء ميكرولتر من YPD المتوسطة قطرة قطرة على طول سلك سبائك النيكل والتيتانيوم للفئران في مجموعة الزرع الفارغة.
باستخدام خياطة النايلون ، أغلق طبقة الجرح بطبقة. بعد ذلك ، قم بتلقيح ميكرولتر من خلايا المبيضات البيض في الفضاء المشترك للفئران على طول سلك سبائك النيكل والتيتانيوم في مجموعة PJI. باستخدام خياطة النايلون ، أغلق طبقة الجرح بطبقة.
إيواء الفئران مع حرية الوصول إلى الماء والطعام لمدة 14 يوما.
