SWITCH - H2O2 - Antigen Retrieval - TDE (SHORT) Tissue Transformation Technique

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

88 Views

•

02:57 min

•

January 26th, 2024

DOI :

10.3791/200806-v

January 26th, 2024

•

Danila Di Meo*¹, Josephine Ramazzotti*¹, Marina Scardigli*¹^,², Franco Cheli¹, Luca Pesce¹^,³, Niamh Brady¹, Giacomo Mazzamuto¹^,⁴^,⁵, Irene Costantini¹^,⁴^,⁶, Francesco S. Pavone¹^,⁴^,⁵

¹European Laboratory for Non-linear Spectroscopy (LENS), University of Florence, ²Division of Physiology, Department of Experimental and Clinical Medicine, University of Florence, ³Department of Physics, University of Pisa, ⁴National Research Council - National Institute of Optics (CNR-INO), ⁵Department of Physics and Astronomy, University of Florence, ⁶Department of Biology, University of Florence

* These authors contributed equally

Transcript

ابدأ بوضع أقسام الدماغ المثبتة بالفورمالين والمضمنة بالبارافين في أطباق ذات أغطية لولبية. قم بتوصيل محلول إيقاف التشغيل بالأطباق ، وقم بتغطيتها بورق الألمنيوم ، واحتضانها عند أربع درجات مئوية أثناء الهز ليوم واحد. في اليوم التالي ، قم بنقل جميع العينات إلى أطباق جديدة واحتضانها بمحلول التشغيل كما هو موضح سابقا.

في نهاية الحضانة ، ضع العينات في أنابيب واغسلها ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني لمدة ساعتين أثناء الهز. ثم أضف محلول التعطيل إلى العينات واحتضانها طوال الليل في حمام مائي عند 37 درجة مئوية. بعد إجراء ثلاث غسلات ، أضف محلول التطهير إلى العينات واحتضانها في حمام مائي بدرجة حرارة 55 درجة مئوية لمدة ثلاثة إلى سبعة أيام.

في نهاية الحضانة ، اغسل العينات باستخدام PBST عند 37 درجة مئوية لمدة ثلاث ساعات في حاضنة. في اليوم التالي ، أضف 10 ملليلتر من 30٪ بيروكسيد الهيدروجين إلى كل عينة ، واغسل العينات ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق أثناء الهز في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، سخن محلول استرجاع المستضد إلى 95 درجة مئوية في حمام مائي.

انقل العينات إلى المحلول الساخن واحتضانها عند 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق ، تليها 40 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على شاكر. اغسل العينات بالماء منزوع الأيونات لمدة خمس دقائق أثناء الهز. موازنة العينات في برنامج تلفزيوني.

الآن نقل العينات إلى الأطباق مع أغطية المسمار. بعد تحضير محلول الأجسام المضادة الأولية الطازجة لجميع العينات في دورق ، أضفه إلى العينات واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة يوم إلى سبعة أيام مع رج لطيف في الظلام. ثم ضع العينات في أنابيب واغسلها باستخدام PBST المسخن مسبقا عند 37 درجة مئوية في الحاضنة.

انقل العينات إلى الأطباق ذات الأغطية اللولبية وأضف الأجسام المضادة الثانوية المحضرة في PBST و 0.01٪ أزيد الصوديوم. انقل العينات إلى الأنابيب واغسلها بالتسخين المسبق PBST ثلاث مرات عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين أثناء الرج. لمطابقة معامل الانكسار ، ضع العينات في أطباق جديدة وأضف محلول 30٪ من TDE.

ثم استبدل 30٪ TDE بمحلول 68٪ TDE في العينات واتركها في درجة حرارة الغرفة أثناء الرج. بعد المعالجة القصيرة ، تم تحقيق الشفافية المثلى والمتجانسة لجميع شرائح الأنسجة في كل من المادة الرمادية والبيضاء.

Explore More Videos

JoVE

From the series

عالية الدقة 3D إعادة بناء الدماغ البشري مع SHORT و LSFM