Extraction and Analysis of DNA from the Cellular Component of the Eye Humor

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

259 Views

•

02:08 min

•

January 12th, 2024

DOI :

10.3791/200816-v

January 12th, 2024

•

Noah A. Brown¹, Rajesh C. Rao¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷^,⁸, Bryan L. Betz¹

¹Department of Pathology, University of Michigan, Ann Arbor, ²Department of Ophthalmology and Visual Sciences, Kellogg Eye Center, University of Michigan, Ann Arbor, ³Department of Human Genetics, University of Michigan, Ann Arbor, ⁴Rogel Cancer Center, University of Michigan, Ann Arbor, ⁵Center of Computational Medicine and Bioinformatics, University of Michigan, Ann Arbor, ⁶Center for RNA Biomedicine, University of Michigan, Ann Arbor, ⁷A. Alfred Taubman Medical Research Institute, University of Michigan, Ann Arbor, ⁸Section of Ophthalmology, Surgery Service, Veterans Administration Ann Arbor Healthcare System

Transcript

لإجراء استخراج الحمض النووي ، أضف أولا كمية مناسبة من محلول تحلل الخلايا إلى حبيبات الخلية التي تم الحصول عليها من فكاهة العين. ماصة الحل صعودا وهبوطا لخلطها جيدا. بمجرد تحلل الخلايا بالكامل ، أضف محلول راسب البروتين لتكوين ثلث الحجم الكلي.

الآن ، دوامة وتخلط بقوة لمدة 20 إلى 30 ثانية. ثم قم بتدويره لمدة ثلاث دقائق عند 3000 جرام في درجة حرارة الغرفة. وفي الوقت نفسه ، قم بنقل 300 ميكرولتر من الأيزوبروبانول إلى أنبوب طرد مركزي نظيف.

بمجرد اكتمال الطرد المركزي ، قم بسحب المادة الطافية بعناية في الأنبوب الذي يحتوي على الأيزوبروبانول. بعد ذلك ، أضف 1.5 ميكرولتر من الجليكوجين إلى الأنبوب واقلب الأنبوب ليختلط جيدا. ضع الأنبوب في درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر في الفريزر لمدة ساعة أو طوال الليل لتسهيل ترسيب الحمض النووي.

بعد التجميد ، قم بطرد الأنبوب لمدة خمس دقائق عند 3000 جرام في درجة حرارة الغرفة. ثم ، ماصة خارج الأيزوبروبانول. لغسل الحبيبات ، أضف 0.5 ملليلتر من الإيثانول بنسبة 70٪.

اقلب الأنبوب برفق لضمان الغسيل المتساوي. ثم أدر الأنبوب لمدة دقيقة واحدة عند 3000 جرام في درجة حرارة الغرفة. تخلص من المادة الطافية من أنبوب الطرد المركزي.

الآن ، اقلب الأنبوب على شاش نظيف لتصريف المحلول وتجفيف الحبيبات. بعد الدوران السريع في جهاز الطرد المركزي الدقيق ، استخدم طرف ماصة يمكن التخلص منه لمرة واحدة لامتصاص قطرة الإيثانول المتبقية. بعد ذلك ، أضف 45 ميكرولترا من محلول ترطيب الحمض النووي إلى حبيبات الحمض النووي المجففة.

ثم ضع الأنبوب في كتلة تسخين مضبوطة على 50 درجة مئوية. كانت غلة الحمض النووي لكل من المكونات الخلوية والخالية من الخلايا في سوائل العين متشابهة. تم إجراء تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل للمكونات الخلوية والخالية من الخلايا للطفرة المرتبطة بسرطان الغدد الليمفاوية الزجاجية.

كان معدل طفرة أعلى موجودا في المكون الخالي من الخلايا كما يتضح من عتبة الدورة المنخفضة.

Explore More Videos

DNA Extraction

Eye Humor

Cell Lysis

Protein Precipitation

Vitreoretinal Lymphoma