الحفاظ على الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية المشتقة من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية مع الحفظ الأمثل بالتبريد

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

40 Views

•

02:51 min

•

November 3rd, 2023

DOI :

10.3791/200824-v

November 3rd, 2023

•

Xinyue Bai*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Ting Zhang*¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xinyue Zhu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xianyu Huang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Haiyun Liu¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaoyan Ding⁸, Mei Jiang¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷, Xiaodong Sun¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷

¹Department of Ophthalmology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, ²National Clinical Research Center for Eye Diseases, ³Shanghai Clinical Research Center for Eye Diseases, ⁴Shanghai Key Clinical Specialty, ⁵Shanghai Key Laboratory of Ocular Fundus Diseases, ⁶Shanghai Engineering Center for Visual Science and Photomedicine, ⁷Shanghai Engineering Center for Precise Diagnosis and Treatment of Eye Diseases, ⁸Stem Cell Core Facility, CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science, Chinese Academy of Sciences

* These authors contributed equally

Transcript

للبدء ، قم بفصل الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية المشتقة من hESC ، وقم بإعداد تعليق الخلية ، ثم عد الخلايا. الآن ، أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 250g لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة. اسكب المادة الطافية ، ثم أعد تعليق حبيبات الخلية في وسط الحفظ بالتبريد.

بعد ذلك ، انقل ملليلتر واحد من تعليق الخلية إلى قارورة مبردة سعة 1.2 ملليلتر. ضع القوارير المبردة في وعاء تجميد وقم بتجميدها طوال الليل عند 80 درجة مئوية تحت الصفر. نقل القوارير إلى النيتروجين السائل للتخزين على المدى الطويل.

لإذابة القوارير المجمدة ، قم أولا بتسخين وسط الاستزراع في حبات معدنية يتم تسخينها إلى 37 درجة مئوية ، واملأ مسبقا 10 ملليلتر من وسط الاستزراع الدافئ في أنبوب سعة 15 ملليلتر. الآن ، قم بإزالة القوارير المبردة من النيتروجين السائل وضعها في نظام ذوبان آلي للذوبان السريع. قم بإسقاط 0.5 إلى ملليلتر واحد من وسط الاستزراع المسخن مسبقا في القارورة المبردة لضمان التكيف التدريجي للخلية.

ثم ، ماصة 1.5 إلى 2 ملليلتر من تعليق الخلية إلى أنبوب 15 ملليلتر مع متوسط. أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 250g لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم تخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الحبيبات في ملليلتر من الوسط الدافئ. قم بتحميل الخلايا في مقياس الدم وعدها لتحديد معدلات الشفاء والبقاء على قيد الحياة. استزرع الخلايا المذابة على الألواح المطلية بالغشاء القاعدي في وسط استزراع باستخدام Y27632.

أظهرت الخلايا الظهارية الصبغية في شبكية العين التي تم تجميدها في اليوم الخامس في مرحلتها الأسية معدل ارتباط أعلى بعد الذوبان. بالنسبة إلى مورفولوجيتها السداسية المميزة ، كان للخلايا المجمدة في نقاط زمنية أخرى نمط ظاهري ليفي. أظهرت خلايا P2 اليوم الخامس تعبيرا أعلى وعلامات خلايا موضعية بشكل أكثر ملاءمة بعد 28 يوما من الذوبان.

ولوحظ أن وسائط الحفظ بالتبريد المختلفة كان أداؤها جيدا بنفس القدر في تحقيق قابلية عالية للبقاء والتعلق بعد الذوبان.

Explore More Videos

Human Embryonic Stem Cells

Retinal Pigment Epithelial Cells