للبدء ، ضع 200 ذبابة الفاكهة البالغة حديثة الفقس في قفص بلاستيكي على شكل أسطوانة. أغلق جانبا واحدا من القفص بشبكة معدنية مسامية للتهوية والآخر بعصير الفاكهة وطبق أجار معجون الخميرة. في يوم الحقن ، استبدل طبق أجار القفص بطبق عصير فواكه يحتوي على الحد الأدنى من معجون الخميرة.
احتضان اللوحة عند 25 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة لجمع الأجنة. ثم أخرج الطبق من القفص لوقف وضع البيض واحتضانه عند 25 درجة مئوية لمدة ساعتين إضافيتين للحصول على أجنة عمرها ساعتان إلى ثلاث ساعات. لإزالة قشر البيض من الأجنة ، أدخل ملليلتر من محلول التبييض بنسبة 50٪ إلى طبق عصير الفاكهة.
باستخدام فرشاة الرسم ، قم بإخراج الأجنة برفق من اللوحة واحتضان اللوحة لمدة دقيقتين أثناء تدويرها كل 30 ثانية لتعزيز كفاءة إزالة قشر البيض. ثم صب الجنين وخليط التبييض في مصفاة خلية نايلون 70 ميكرومتر. اشطف الأجنة جيدا بزجاجة ماء للتخلص من أي بقايا مبيض ومعجون خميرة.
باستخدام شفرة حلاقة نظيفة ، قم بقطع كتلة أغاروز مستطيلة وضع الكتلة على شريحة زجاجية. باستخدام فرشاة الرسم ، انقل الأجنة من المصفاة إلى كتلة الهلام ووزعها بشكل موحد على طول الخط المركزي للكتلة عن طريق تنظيف الأسنان بالفرشاة برفق. الآن ، قم بإعداد ملقط مع ربط ساقيه معا بإحكام لتشكيل نقطة حادة واحدة.
تحت مجهر التشريح ، اختر الأجنة الفردية باستخدام الملقط وقم بمحاذاتها على طول الحافة الممتدة لكتلة الهلام. ماصة 10 ميكرولتر من غراء الهيبتان عند نقطة المنتصف من انزلاق غطاء 24 × 50 ملم. استخدم طرف ماصة لنشر الغراء في مساحة مستطيلة 0.5 × ثلاثة سنتيمترات.
باستخدام ملقط مسطح الرؤوس ، ارفع غطاء الغطاء المطلي بالغراء وثبته بثبات فوق الأجنة ، مع التأكد من أن جانب الغراء يواجه الأجنة بحوالي 45 درجة. اضغط برفق على انزلاق الغطاء على كتلة الهلام ، مما يسمح للأجنة بلمس الغراء. حرر الضغط بسرعة وارفع انزلاق الغطاء.
ثم استغني عن 10 ميكرولتر من الماء في وسط شريحة زجاجية جديدة. ضع الغطاء الحامل للجنين عليه ، مع التأكد من أن جانب الجنين متجها لأعلى. بعد ذلك ، ضع 40 ميكرولترا من زيت الكربون هالة على طرف واحد من شريط الجنين.
قم بزاوية الشريحة حتى يغطي زيت الكربون الهالة سطح الجنين.
