للبدء ، خذ فيلما بلاستيكيا من البولي إيثيلين بطول 16 سم وعرض 12 سم وسمك 20 ميكرومتر. استخدم أداة طحن الزجاج للضغط على 30 نتوءا نصف دائري في تخطيط PCR قياسي مكون من 96 بئرا. قم بتعريض جانبي فيلم البولي إيثيلين البلاستيكي المضغوط لضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة ساعة واحدة لتطهيره.
أضف كمية صغيرة من كحول البولي فينيل 10٪ إلى السطح شبه الدائري. بعد ذلك ، ضع حوالي 3،000 من دبابير trichogramma dendrolimi المخدرة في صندوق تجميع. ضع الجانب المحدب من بطاقة بيضة الفيلم باتجاه صندوق التجميع وقم بتأمين الحواف بشريط مطاطي.
أضف الآن أربعة ميكرولتر من محلول الأحماض الأمينية لكل نتوء. ثم قم بتغطيتها بقطعة أخرى من فيلم بلاستيك البولي إيثيلين. استخدم شريطا مطاطيا لتغطية صندوق التجميع بإحكام بصفحتين من البلاستيك.
اسمح للدبابير بالتطفل بحرية لمدة أربع إلى ثماني ساعات. توفير 10٪ من ماء السكروز من خلال القطن الرطب أثناء التطفل. بعد ذلك ، احصل على محلول الأحماض الأمينية المتطفل من النتوء الداخلي لبطاقة البيض الاصطناعية وانقله إلى غطاء أنابيب 1.45 ملليلتر.
قم بتغطية غطاء الأنبوب بشبكة نايلون 10 ميكرومتر ، يبلغ قطرها 25 ملم. ثم اربط شبكة النايلون في الأنبوب برفق. جهاز طرد مركزي الأنبوب الأيمن العلوي عند 1،360 جم لمدة 10 ثوان.
جمع الحل المصفى الذي يحتوي على السم. قم بتخزين السم في درجة حرارة 80 درجة مئوية تحت الصفر لإجراء مزيد من التحليلات. أظهر تحليل BCA لعينات السم أن تركيز بروتين السم تراوح من 0.35 إلى 0.46 ميكروغرام لكل ميكرولتر.
كان التحكم السلبي في محلول الأحماض الأمينية يحتوي فقط على تركيز بروتين يتراوح من 0.03 إلى 0.05 ميكروغرام لكل ميكرولتر. أظهر تحليل SDS-PAGE للسم نطاقا من البروتين يمتد من أقل من 10 كيلودالتون إلى أكثر من 130 كيلو دالتون في الحجم.
