Murine Bone Marrow Staining for the Characterization of Myeloid Leukemia Microenvironment

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

114 Views

•

02:59 min

•

November 10th, 2023

DOI :

10.3791/200883-v

November 10th, 2023

•

Christina M. Kaszuba¹^,², Benjamin J. Rodems¹^,³, Sonali Sharma¹^,³, Edgardo I. Franco¹^,², John M. Ashton¹^,³^,⁴, Laura M. Calvi¹^,⁵, Jeevisha Bajaj¹^,³

¹Wilmot Cancer Institute, University of Rochester Medical Center, ²Department of Biomedical Engineering, University of Rochester, ³Department of Biomedical Genetics, University of Rochester Medical Center, ⁴Genomics Research Center, University of Rochester Medical Center, ⁵Division of Endocrinology and Metabolism, Department of Medicine, University of Rochester Medical Center

Transcript

للبدء ، امزج معلق نخاع عظم الفئران المعزول مع تعليق شبيكة العظام. ماصة 10 ميكرولتر من تعليق الخلية على مقياس الدم للعد. أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية عند 300 G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية.

ثم أعد تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS. لتلطيخ الخلايا بالأجسام المضادة للنضوب المغناطيسي ، أضف كتلة FC و CD45 APC و TER-119 APC. ثم اغسل تعليق الخلية باستخدام المخزن المؤقت FACS.

بعد الطرد المركزي للخليط المتبقي ، أعد تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS. لتلطيخ تعليق الخلية بالميكروبيدات للنضوب المغناطيسي ، أضف الماوس IgG والميكروبيدات المضادة ل APC. احتضان الخليط على الجليد لمدة 20 دقيقة.

اغسل عمود LD بملليلتر من المخزن المؤقت MACS. أعد تعليق الخلايا في المخزن المؤقت ، ثم قم بترشيحها من خلال أنبوب اختبار سعة خمسة ملليلتر مع غطاء مصفاة خلية 35 ميكرومتر. بعد ذلك ، اضبط عمود LD على حامل الفاصل المغناطيسي وضع أنبوب اختبار سعة خمسة ملليلتر أسفل العمود لجمع المواد المستخلصة.

ماصة تعليق الخلية في عمود LD وجمع تدفق الكسر السالب من خلال أنبوب الاختبار. اغسل العمود مرتين بمليلتر واحد من المخزن المؤقت MACS واجمع المادة الملونة في نفس الأنبوب. ضع عمود LD فوق أنبوب اختبار جديد سعة خمسة ملليلترات.

باستخدام ماصة ، قم بتوزيع ثلاثة ملليلتر من المخزن المؤقت في العمود ، ثم اغسل الخلايا ذات العلامات الموجبة في أنبوب اختبار سعة خمسة ملليلترات. أجهزة الطرد المركزي على حد سواء الكسور الموجبة والسالبة ، ثم إعادة تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS. لتلطيخ الكسر السلبي CD45 TER-119 ، أضف ميكرولتر واحد من كل جسم مضاد لكل 10 إلى الخلايا السادسة.

ضع التعليق على الجليد لمدة 20 دقيقة. ثم اغسل التعليق بملليلتر من المخزن المؤقت FACS قبل الطرد المركزي. أضف ملليلترا واحدا من المخزن المؤقت إلى الحبيبات ويوديد البروبيديوم الماصة لتلطيخ الخلايا الحية.

أخيرا ، قم بتصفية العينة من خلال مصفاة خلية 35 ميكرومتر إلى أنبوب اختبار سعة خمسة ملليلتر قبل تحليل الخلايا على مقياس التدفق الخلوي متعدد الألوان. توسعت الخلايا البطانية الشريانية بشكل كبير في البيئة المكروية لسرطان الدم النخاعي الحاد مع فقدان مصاحب في مجموعات البطانة الجيبية. شوهد توسع صغير في خلايا اللحمة المتوسطة في عمر ثمانية أسابيع.

Explore More Videos

Arteriolar Endothelial Cells

Sinusoidal Endothelial Cells

Mesenchymal Stromal Cells

From the series

عزل وتوصيف البيئة المكروية لنخاع العظم في الأورام النخاعية