Hepatocellular Carcinoma Tissue Dissociation for Organoid Culture

لبدء تفكك الأنسجة ، اجمع سنتيمترا إلى سنتيمترين مكعبين من سرطان الخلايا الكبدية أو أنسجة HTC من المرضى غير المعالجين. ثم ضع المنديل في محلول حفظ الأنسجة واحتفظ به عند أربع درجات مئوية حتى المعالجة. الآن ، سخن ألواح زراعة الخلايا السطحية ذات التعلق المنخفض للغاية لمدة ساعة واحدة في حاضنة محددة عند 37 درجة مئوية.

قم بإذابة مستخلص الغشاء القاعدي طوال الليل عند أربع درجات مئوية. باستخدام مقص جراحي ، قم بتقطيع أنسجة الورم إلى قطع صغيرة على طبق بتري داخل غطاء التدفق الصفحي. انقل هذه القطع إلى أنبوب مخروطي حجمه 15 ملليلتر وأضف خمسة إلى 10 ملليلترات من الوسط القاعدي.

باستخدام ماصة باروتروبيك ، اغسل أكبر قدر ممكن من الدم. اترك الخليط يستقر لمدة دقيقة إلى دقيقتين قبل إزالة بعض المواد الطافية ، بما في ذلك أي خلايا دم وجلطات دهنية عائمة. بعد ذلك ، قم بطرد الخليط عند 300 غرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.

ثم استخرج بعناية المادة الطافية وأضف خمسة ملليلتر من محلول الهضم قبل التسخين إلى الأنسجة المشذبة. ضع الأنبوب عند 37 درجة مئوية في دوار للحصول على الهضم الأمثل. بعد 30 دقيقة من الهضم الأولي ، استخدم المجهر للبحث عن مجموعات الخلايا الصغيرة.

لإيقاف الهضم ، أضف خمسة ملليلتر من الوسط القاعدي البارد إلى الأنبوب. ثم استخدم مرشحا خلويا حجمه 100 ميكرومتر للغربلة في أنبوب جديد سعة 50 ملليلتر. املأ الأنبوب بوسط قاعدي بارد للوصول إلى حجم إجمالي قدره 50 ملليلتر.

بعد ذلك ، قم بطرد الخلايا عند اثنين G لمدة 10 دقائق عند ثماني درجات مئوية. بمجرد الانتهاء ، قم بإزالة السائل الطافي بعناية. أعد تعليق الحبيبات في 50 ملليلتر من الوسط القاعدي البارد للحصول على حبيبات الخلية للطلاء العضوي.