للبدء ، شطف يرقات ذبابة الفاكهة المرحلة L3 ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منهما في برنامج تلفزيوني بارد. باستخدام زوجين من الملقط الحاد ، أمسك الجزء الأمامي من اليرقات وقم بإزالة ما يقرب من 2/3 من أنسجة الجسم. امسك أول 1/3 من اليرقات بزوج واحد من الملقط وخطافات الفم مع الزوج الآخر.
ثم اسحب خطافات الفم داخل اليرقات حتى تنقلب اليرقات بالكامل. قم بإزالة أقراص الساق والدماغ للحصول على جثة يرقية مقلوبة نظيفة مع زوج من أقراص الجناح المتصلة بالقصبة الهوائية. انقل أقراص الجناح إلى أنبوب طرد مركزي سعة ملليلتر واحد.
ثبت أقراص الجناح في 4٪ بارافورمالدهيد مخفف في برنامج تلفزيوني لمدة 45 دقيقة في درجة حرارة الغرفة تحت الإثارة. بعد التثبيت ، اغسل العينات ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منها 70٪ إيثانول. قم بإزالة الرؤوس والبطن والساقين والأجنحة من الذباب المخدر وضع الصدر المشريح في برنامج تلفزيوني بارد.
بادئة الصدر في 4٪ بارافورمالدهيد مخفف في 1٪ تريتون لمدة 20 دقيقة تحت الإثارة. ثم اغسل العينات ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منها باستخدام PBT تحت الإثارة. ضع الصدر على شريط على الوجهين على شريحة زجاجية ، وقم بتقسيمها باستخدام شفرة ميكروتوم حادة لإنتاج نصفيين.
إصلاح hemithoraces في 4 ٪ بارافورمالدهيد لمدة 45 دقيقة تحت الإثارة. اغسل العينات مرتين لمدة 20 دقيقة لكل منهما باستخدام PBT تحت التحريك. ضع hemithoraces في برنامج تلفزيوني بارد واستخدم ملقط لعزل عضلات الطيران غير المباشرة بعناية عن hemithoraces.
تتخلل العضلات في 70٪ إيثانول لمدة يومين إلى سبعة أيام عند أربع درجات مئوية. بعد النفاذية ، اغسل IFMs مرتين لمدة 20 دقيقة لكل منهما باستخدام المخزن المؤقت A.ثم أضف 400 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتهجين وقم بتهجين العضلات مسبقا لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في خلاط حراري. أضف 100 ميكرولتر من محلول التهجين الطازج الذي يحتوي على المسبار والجسم المضاد الأساسي.
احتضان العينات في الظلام عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة عند 300 دورة في الدقيقة في خلاط حراري. بعد الحضانة ، اغسل العينات ثلاث مرات باستخدام المخزن المؤقت الدافئ A لمدة 10 دقائق لكل منهما. ثم احتضان العينات في الأجسام المضادة الثانوية و DAPI المخفف في المخزن المؤقت A عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة.
اغسل العينات ثلاث مرات باستخدام المخزن المؤقت B لمدة 20 دقيقة لكل منها قبل نقلها إلى شريحة المجهر. امسح المخزن المؤقت المتبقي B وأضف 30 ميكرولترا من وسيط التثبيت على الشريحة. ضع غطاء مقاس 18 × 18 ملم على الشريحة وأغلق قسيمة الغطاء باستخدام طلاء الأظافر.
