للبدء ، قم بتغطية غشاء منصة زراعة الخلايا القابلة لإعادة التكوين المجمعة بخمسة ميكروغرام لكل سنتيمتر مربع من الفبرونيكتين لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة لتحسين ارتباط الخلية. ثم ، باستخدام ماصة p200 ، نضح محلول الطلاء. ضع استنسل الزخرفة في الوحدة الأساسية جيدا.
أضف وسائط خلوية إلى القناة السفلية والسفلية للجهاز. زرع الخلايا البطانية الوريدية السرية البشرية في البئر. ضع الجهاز في طبق بتري.
أضف غطاء أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر يحتوي على ماء منزوع الأيونات إلى طبق بتري للحفاظ على الرطوبة المحلية. نقل إعداد طبق بتري إلى الحاضنة. لزرع الخلايا تحت التدفق ، تابع إعادة تكوين النظام الأساسي من البئر المفتوح إلى وضع الموائع الدقيقة.
للقيام بذلك ، املأ الخزانات والأنابيب بوسائط نمو الخلايا البطانية. ضع السكن السفلي على مرحلة العينة. أدخل الوحدة الأساسية للبئر المفتوح في السكن السفلي ، ثم قم بإزالة الاستنسل ، واستنشاق وسائط الخلية من بئر الوحدة ، ووضع وحدة التدفق في البئر.
بعد ذلك ، ضع الغلاف العلوي لإغلاق وحدة التدفق في بئر الوحدة الأساسية. قم بتوصيل أطراف توزيع المدخل والمخرج بمنافذ وحدة التدفق. ابدأ تشغيل المضخة التمعجية لإدخال تدفق السوائل في النظام.
أوقف المضخة عند الوصول إلى الوقت المطلوب للتعرض المطلق للتدفق. قم بإزالة أطراف توزيع المدخل والمخرج ، ثم قم بإزالة الغلاف العلوي. قم بإزالة وحدة التدفق برفق من البئر باستخدام الملقط.
أخيرا ، أضف 100 ميكرولتر من وسائط الخلية إلى البئر قبل إجراء الفحص المطلوب. الخلايا المزروعة تحت التدفق ، محاذاة على طول اتجاه التدفق ، في حين أن الخلايا المزروعة بدون تدفق ظلت موجهة بشكل عشوائي. أدى تعرض الخلايا للإجهاد المطلق إلى زيادة تنظيم العامل الشبيه ب Kruppel 2 وسينسيز أكسيد النيتريك البطاني ، والتي تؤدي أدوارا حاسمة في الأوعية الدموية السليمة.
