التحقق من هوية خلايا MPNST ذات المرور المبكر والطعم الخيفي للخلايا السرطانية المبكرة لإثبات الورم

للبدء ، ضع أغطية معقمة في آبار أطباق زراعة الأنسجة المكونة من ستة آبار وصب كمية كافية من Poly-L-Lysine ومحلول صفح في الآبار لتغطية غطاء الغطاء. بعد ذلك ، أغلق اللوحة بغلاف بلاستيكي للحد من التبخر ، واحتضانها عند أربع درجات مئوية طوال الليل. في صباح اليوم التالي ، اغسل أغطية الغطاء ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني معقم.

أضف ملليلتر من تعليق الخلية ووسائط النمو إلى اللوحة 10،000 خلية لكل بئر يحتوي على غطاء الغطاء. بعد غسل أغطية الغطاء باستخدام PBS ، قم بإصلاح الخلايا بمحلول بارافورمالدهايد 4٪ و PBS لمدة 18 دقيقة. شطف أغطية ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني لمدة خمس دقائق قبل تلطيخ المناعة.

احتضان أغطية الأغطية الملطخة والمغسولة في واحد إلى خمسة ميكروغرام من صبغة Hoechst لمدة 10 دقائق. ثم اغسل أغطية الغطاء باستخدام PBS لمدة خمس دقائق إضافية. قم بتركيب الشرائح باستخدام نسبة متساوية من PBS وخليط الجلسرين والتقاط الصور باستخدام مجهر الفلورسنت.

عالج الخلايا بمحلول تفكك الخلايا غير الأنزيمي لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة. ثم أضف خمسة ملليلتر من DMEM لكل ملليلتر واحد من كاشف تفكك الخلايا غير الأنزيمية. عد الخلايا باستخدام مقياس الدم.

أجهزة الطرد المركزي الخلايا في 5G لمدة خمس دقائق. أعد تعليق الخلايا بتركيز واحد إلى مرتين في 10 من الخلايا السادسة لكل 100 ميكرولتر من DMEM. ضع على بطنه وعقم موقع الحقن بنسبة 70٪ إيثانول.

حقن واحد إلى اثنين من 10 من الخلايا السادسة تحت الجلد في الجناح الأيمن. ضع الماوس بمفرده في قفص خال من الفراش واتركه يتعافى. لمنع انخفاض حرارة الجسم ، ضع جزءا من القفص على وسادة التدفئة.

يتم عرض صور منخفضة وعالية الطاقة لخلايا P0 GGF beta 3 MPNST ذات المرور المبكر. تم العثور على الخلايا لتكون ورمية ، وتشكيل مستعمرات في أجار لينة والطعوم في الفئران التي تعاني من نقص المناعة.