للبدء ، انقل الجراء إلى قفص منفصل بعيدا عن السد أثناء التعامل معهم. قبل البدء في إجراء الحقن ، باستخدام مجهر التشريح ، تأكد من المساحة الفقرية ، أو على الأقل ، خط الوسط للقناة الشوكية للجرو. قم بتحميل حقنة 25 أو 10 ميكرولتر مع 10 ميكرولتر من مادة الحقن المطلوبة مثل تركيبة الدواء أو تحضير الفيروسات أو التحكم في السائل الشوكي الاصطناعي وما إلى ذلك.
بمجرد تخدير بالكامل ، كما يتضح من انخفاض حركة الجسم أو غيابها ، ضع الجراء برفق تحت المجهر. باستخدام السبابة اليسرى والإبهام ، قم بتحسس المساحة الفقرية بعناية على طول خط الوسط ، وتقع بين أحزمة الحوض الثنائية. قم بتدوير قاعدة الذيل برفق قليلا للمساعدة في تحديد خط الوسط للعمود الفقري.
أدخل الإبرة بعناية ، وقم بإمالتها بزاوية من 70 إلى 80 درجة عند النقطة التي تتقاطع فيها المسافة البادئة مع ضمان بقائها محاذاة مع المستوى السهمي المركزي. عندما تتلامس الإبرة مع العظم ، قلل الزاوية تدريجيا إلى حوالي 30 درجة وادفع الإبرة حوالي ملليمترين في الفضاء بين الفقرات. حقن ببطء ما يصل إلى 10 ميكرولتر في غضون 50 إلى 60 ثانية.
احتفظ بالإبرة في مكانها لمدة 10 إلى 20 ثانية بعد اكتمال الحقن. اسحب الإبرة بتدوير لطيف لتجنب التسرب. بعد الحقن ، ضع الجرو على وسادة تدفئة لمدة 10 إلى 15 دقيقة للسماح للجرو بالتعافي تماما وإعادة التدفئة.
أدى إعطاء الحقن داخل القراب للأخضر السريع في حديثي الولادة من النوع البري على الفور إلى التوزيع الواسع النطاق للمحلول الذي يتم إعطاؤه. أظهرت الفئران المراسلة YFP تعبيرا واسع النطاق عن YFP عبر الدماغ بأكمله بعد 10 أيام من الحقن داخل القراب لتحرير الجينات القائم على CRISPR-Cas9.
