للبدء ، استخدم ماصة متعددة القنوات لماصة 100 ميكرولتر من 10 مللي مولار سيستين في آبار صفيحة 96 بئرا في غطاء معقم. بعد احتضان اللوحة ، قم باستنشاق المحلول بعناية من البئر وتجنب خدش القطب. شطف الآبار مرتين بالماء منزوع الأيونات المعقم.
بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من كولاجين ذيل الفئران الطازج في كل بئر. احتضان اللوحة جيدا لمدة ساعة تحت الإضاءة المنخفضة قبل غسلها مرتين بالماء منزوع الأيونات. بعد ذلك ، انقل الخلايا البطانية للدماغ المحصودة إلى حوض معقم جديد.
باستخدام ماصة متعددة القنوات ، أضف 100 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى كل بئر يكمل البذر في 30 ثانية ، واحتفظ بوسائط بئر واحدة فقط لأغراض النمذجة الرياضية. على محول 96 لوحة بئر ، حرك المشابك الحمراء على كل جانب للخارج للسماح بإدخال اللوحة. على وجه التحديد ، قم بمحاذاة بئر A one من اللوحة مع منطقة A one من المحول واضغط برفق أعلى اللوحة لتثبيتها بإحكام في مكانها.
ثم قفل المشابك الحمراء مرة أخرى. اضغط على الإعداد لبدء تشغيل الأداة بعد إغلاق الحاضنة ، وسيتم الإشارة إلى جميع الآبار المكتشفة بشكل صحيح باللون الأخضر على خريطة اللوحة. اضغط على زر الاختيار لمصادقة قراءات المعاوقة المطلقة.
استخدم الآن القائمة المنسدلة أسفل خريطة اللوحة لتحديد نوع اللوحة المستخدمة في التجربة. حدد متعدد الترددات لقياس المعاوقة عند ترددات التيار المتردد المختلفة. أخيرا ، انقر فوق زر البدء لبدء التجربة.
اسمح للخلايا بالتكاثر حتى تتشكل طبقة أحادية عالية المقاومة يشار إليها بزيادة الأوم. تأكد من وصول نمو الخلايا إلى هضبة قبل إعداد حلول العلاج. لتحضير محاليل المعالجة ، ضع أنابيب عنقودية من مادة البولي بروبيلين سعة 1.1 ملليلتر في ألواح أنابيب الشريط.
أضف ثلاثة 50 ميكرولترا من السيتوكينات أو الخلايا المعالجة إلى الأنبوب باتباع خريطة لوحة معدة مسبقا. ثم ضعها في الحاضنة للدفء. على برنامج EISs.
انقر فوق إيقاف مؤقت لإيقاف التجربة الجارية مؤقتا. عند المطالبة ، افتح الحاضنة وحرر كلا المقطعين الأحمرين بعناية أثناء تثبيت اللوحة. مع استمرار التجربة في حالة التوقف المؤقت ، انقل اللوحة إلى غطاء المحرك المعقم.
ثم قم بإزالة أنابيب العلاج المجردة من الحاضنة. مع ماصة متعددة القنوات. أعد تعليق محتويات الأنابيب المجردة بعناية من العلاج.
الآن ماصة خارج 100 ميكرولتر من المعالجة من الأنابيب المجردة ونقلها إلى الآبار المناسبة على لوحة البئر 96 ، إضافة وسائط كاملة فقط إلى الآبار الخالية من الخلايا. حاول إنهاء السحب في أقل من خمس دقائق لأن التبريد المفرط للوحة يمكن أن يؤثر على مقاومة الطبقة الأحادية للخلية البطانية. أعد توصيل اللوحة المعالجة بالجهاز ، ثم تحقق لتقييم مقاومة بئر القطب.
تأكد من تحديد إعدادات الاستحواذ الصحيحة متعددة الترددات وكتالوج اللوحة. ثم اضغط على استئناف لمتابعة التجربة. بمجرد تقدم التجربة إلى نقطة النهاية المطلوبة ، اضغط على إنهاء لحفظ الملف المسجل تلقائيا.
انتقل إلى ملف ، وانقر فوق تصدير البيانات لتصدير البيانات كملف XLS أو CSV لمزيد من التحليل. لوحظت زيادة في المقاومة على مدى 30 ساعة تشير إلى مرحلة نمو الخلايا البطانية. خلال مرحلة النمو ، استقرت الخلايا عند مستويات مختلفة لمدة 48 ساعة ، وسمح تطبيع القياس بتفسير أكثر موثوقية لتغيرات المقاومة.
أدى عدد الخلايا غير الصحيح للخلايا البطانية في الدماغ قبل العلاج إلى مرحلة نمو متقلبة ، والتي انخفضت تدريجيا إلى هضبة مقاومة مستقرة. أدت كثافة بذر الخلايا المحسنة وحجم التحميل إلى مرحلة نمو مثالية. يبدو أن السيتوكينات لها تأثير عابر على الحاجز.
أدت إضافة خلايا سرطان الجلد إلى تقليل مقاومة الحاجز بشكل كبير. تذبذب الحاجز شبه الخلوي والمكون القاعدي مع إضافة السيتوكينات ، وأدت إضافة خلايا سرطان الجلد إلى انخفاض أكبر في الحاجز شبه الخلوي بالنسبة للمكون القاعدي.
