الكشف عن إشارات الكالسيوم داخل الخلايا في جدار الأوعية الدموية المعزول مغناطيسيا CD34⁺ الخلايا الجذعية

للبدء ، اعزل الخلايا الجذعية الإيجابية CD34 لجدار الأوعية الدموية المقيم من نماذج الفئران. الحصول على خلايا نقية عن طريق فرز الخلايا المنشطة المغناطيسية وتوصيفها. للكشف عن إشارات الكالسيوم ، احصل على غطاء مغطى مسبقا بالخلايا واغسله مرة واحدة باستخدام برنامج تلفزيوني.

ثم احتضان الخلايا بمحلول Fura 2-AM و Tyrode لمدة 30 دقيقة في الظلام. لإزالة الصبغة ، احتضان الخلايا بمحلول Tyrode لمدة 10 دقائق. ثم قم بتركيب الغرفة على مرحلة مجهر مضان مقلوب ، وافتح النافذة الرئيسية وانتقل إلى مربع حوار إعدادات الاستيلاء وصفحة الكاميرا.

اضغط على الزر المباشر لعرض الصورة الحية. للحصول على الصور ، ارسم عدة خطوط يدوية لوضع دائرة حول الخلايا بألوان مختلفة وحدد مسبقا مناطق الاهتمام. أظهر الفحص المجهري الفلوري أن إعطاء ATP زاد من مستويات الكالسيوم داخل الخلايا في الخلايا الجذعية الإيجابية CD34 لجدار الأوعية الدموية المعزول.