التمايز الكبدي للخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان في الثقافات 2D

للبدء ، قم بتغطية كل بئر من صفيحة من ستة آبار بمليلتر واحد من مصفوفة الغشاء القاعدي واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. قم بإزالة المصفوفة المطلية من اللوحة وأضف الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان والمحضرة في وسط AK02N مع استكمال مثبطات ROCK 10 ميكرومولار. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ثلاثة أيام.

بعد ثلاثة أيام ، في اليوم صفر من بدء التمايز الكبدي ، اغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام وسيط RPMI 1640. بعد ذلك ، لبدء تمايز الأديم الباطن ، أضف RPMI B27 GlutaMAX المكمل بثلاثة إلى ستة ميكرومولار CHIR 99021 و 100 نانوجرام لكل مليلتر Activin A في اللوحة. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة.

في اليوم الأول ، استبدل الوسط الحالي ب RPMI B27 GlutaMAX المكمل ب 50 نانوجرام لكل ملليلتر من Activin A.احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة. في اليوم الثاني ، للحث على تمايز السلف الكبدي ، استبدل الوسط الحالي بوسط RPMI B27 GlutaMAX المكمل ب 1٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد ، واستمر في الحضانة لمدة تصل إلى خمسة أيام. في اليوم السابع ، لبدء نضوج خلايا الكبد ، انتقل إلى وسط نضوج خلايا الكبد واحتضانها لمدة 20 يوما عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

في اليوم 27 ، أظهرت الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان أشكالا متعددة الأضلاع ونوى مستديرة ، وهي خصائص خلايا الكبد.