فرز الخلايا المنشطة بالتألق لخلايا الكبد المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات التي يسببها الإنسان

للبدء ، قم بإعداد فرز الخلايا المنشط بالفلورة ، أو آلة FACS ، لفرز الخلايا باتباع إرشادات الشركة المصنعة. ضع أنبوب العينة على جهاز FACS وقم بتحميله. بوابة TMRM- عالية و ALCAM السكان السلبية في منطقة P1 لفرز غير خلايا الكبد.

ثم بوابة TMRM عالية والسكان ALCAM إيجابية في منطقة P2 لفرز خلايا الكبد. جمع الخلايا التي تم فرزها في أنابيب جمع 15 ملليلتر تحتوي على وسط نضوج خلايا الكبد. بعد الفرز ، قم بإزالة أنبوب التجميع من جهاز FACS.

أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية المصنفة عند 200 غرام لمدة خمس دقائق عند 18 درجة مئوية. قم بإزالة المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في ملليلتر من وسط نضج خلايا الكبد مع 10 مثبطات صخور ميكرومولار و 20 سيكلوسبورين نانوي A.Seed الخلايا على الخلايا الليفية الجنينية للفأر المعالج بالميتوميسين C مع وسط نضوج خلايا الكبد في صفيحة من ستة آبار. استزرع الخلايا في حاضنة ثاني أكسيد الكربون 37 درجة مئوية لمدة خمسة أيام قبل تلطيخ المناعة لاختبار نقاء خلايا الكبد.

كشف تحليل FACS الذي أجري في اليوم 27 من التمايز الكبدي عن ارتفاع TMRM وإيجابية ALCAM. يظهر التلوين الكيميائي المناعي لخلايا P1 و P2 المزروعة على الخلايا الليفية الجنينية للفأر بعد الفرز. أظهر اختبار النقاء عن طريق حساب الخلايا الإيجابية للألبومين 0٪ من P1 ، وحوالي 97٪ من خلايا P2 كانت خلايا تشبه خلايا الكبد.