للبدء ، ضع بذور Arabidopsis thaliana Col-0 المعقمة سطحيا على طبق يحتوي على وسط إنبات البذور. بعد يومين من التقسيم الطبقي البارد ، انقل الطبق إلى غرفة زراعة محددة عند 21 درجة مئوية مع فترة ضوئية طويلة ورطوبة 50٪. انقل الشتلات التي يبلغ عمرها أسبوعا واحدا إلى صندوق زراعة نباتي بوسط نمو النبات.
قم بتنمية مزرعة Agrobacterium tumefaciens في وسط LB حتى تصل إلى كثافة بصرية عند 600 نانومتر من 0.9 إلى 1. باستخدام إبرة مثبتة على حقنة الأنسولين ، قم بحقن ما يقرب من 50 ميكرولترا من المزرعة البكتيرية في قاعدة الجذع الفلوري الأساسي لنبتة أرابيدوبسيس عمرها شهر واحد. خدش الأنسجة على سطح الجذع الأساسي مع حقنة.
بعد أسبوعين إلى أربعة أسابيع ، قم باستئصال الجذور المشعرة الناشئة وزرعها على طبق بتري مع وسط نمو الجذر المشعر المكمل بالمضادات الحيوية لقمع نمو البكتيريا الزراعية. ثقافة الجذر شعر في 24 درجة مئوية في الظلام. بعد أسبوع إلى أسبوعين ، قم بتخصيص الجذور المشعرة على اللوحة باستخدام وسط نمو الجذور المشعر وانقل خطوط الجذر المشعرة المختارة إلى وسط جديد كل أربعة إلى خمسة أسابيع.
انقل الجذور المشعرة إلى طبق به وسط تجديد للحث على تكوين الكالس ، والثقافة عند 21 درجة مئوية في فترة ضوئية طويلة ليوم طويل. بمجرد خروج البراعم من الكالس ، قم بقص البراعم ونقلها إلى وسط استطالة البراعم لمدة أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع لتعزيز النمو والاستطالة. ثم انقل البراعم الممدودة إلى وسط تحريض الجذر.
أخيرا ، انقل النبات ذي الجذور إلى التربة لإجراء الانتقاء المعدل وراثيا. في A.thaliana ، تم تحفيز كالي أصفر في غضون 14 يوما في جميع خطوط الجذر المشعرة المختبرة. ظهرت البدائية الأولى ، التي يمكن رؤيتها على شكل بقع خضراء داكنة ، في غضون ثلاثة أسابيع بعد نقلها إلى وسط التجديد.
بعد أربعة أسابيع ، غطت البراعم الجذور المشعرة في 90٪ من الخطوط ، مع بعض الحالات التي تظهر تكوين جذر عرضي. ومع ذلك ، لم يتجدد خط واحد حتى بعد ثلاثة أشهر. بالمقارنة مع النوع البري ، أظهرت مجدد الجذور المشعر ل A.thaliana نمطا ظاهريا قزما مع أنظمة جذر كثيفة وأوراق مجعدة ووقت ازدهار متغير.
