تحليل صور برايتفيلد ومضان لأقسام دماغ الفأر لفحص الضوء والمجهر الإلكتروني المترابط بعد التضمين في Epon

للبدء ، التقط صور Brightfield و Fluorescent لأنسجة دماغ الفأر التي تعبر عن mScarlet. حدد موقع البيانات الأولية لإنشاء خريطة تنقل للعديد من صور Brightfield لمجالات رؤية مختلفة في ImageJ. ثم افتح ImageJ ، وانتقل عبر المكونات الإضافية ، وانقر فوق خياطة ، وحدد خياطة الشبكة أو المجموعة.

انقر فوق كتابة ثعبان الشبكة حسب العمود ، وحدد الترتيب لأعلى ولليسار ، وانقر فوق تعيين حجم الشريحة. انتقل لتحديد مسار البيانات وانقر فوق تعيين اسم الملف ، متبوعا بفحص عرض الانصهار. لاستيراد صور Brightfield متسلسلة لخلية معينة، انقر فوق ملف وحدد استيراد، متبوعا بتسلسل الصور.

لإسقاط كثافة المجموع لهذه الصور، انتقل إلى الصورة، وحدد الحزم المكدسة، وانقر فوق Z projection، ثم انقر فوق مجموع الشرائح. ثم حدد تحرير وانقر فوق عكس لعكس صورة إسقاط كثافة المجموع وتحسين رؤية جسيمات الذهب النانوية. بعد ذلك ، قم باستيراد صور مضان متسلسلة.

لإنشاء صورة إسقاط كثافة المجموع، انقر فوق صورة وحدد مكدسات. ثم انتقل إلى Z projection ، وانقر فوق مجموع الشرائح ، واحفظ الصور بتنسيق TIF. افتح صور إسقاط كثافة المجموع لكل من صور Brightfield و Fluorescence.

انتقل إلى الصورة، وحدد اللون، وانقر فوق دمج القنوات لدمج إسقاط كثافة المجموع لصورة Brightfield مع صورة Fluorescence. بعد ذلك ، حدد الصورة وانقر فوق النوع ، متبوعا بلون RGB لتحويل تنسيق الصورة المركبة إلى RGB. ستظهر جسيمات الذهب النانوية باللون الأخضر ، وسيظهر البروتين الفلوري باللون الأحمر.

ثم احفظ الصورة كملف TIF.