تقييم الفتك والسمية العصبية العضلية للمواد الكيميائية في أجنة الزرد باستخدام مقايسة الاهتزاز المفاجئ

للبدء ، اجمع جنين الزرد وارفعه حتى 72 ساعة بعد الإخصاب في حاضنة عند 28.5 درجة مئوية. في وقت واحد إعداد المواد الكيميائية ليتم اختبارها في التركيز المطلوب. فحص الأجنة بعد 72 ساعة من الإخصاب.

إزالة الأجنة الميتة أو غير المفرغة. ضع 10 أجنة في كل طبق زراعة أنسجة ستة سنتيمترات مع تسعة ملليلتر من وسط E3. وتسمى هذه لوحات التعرض.

قم بتسمية كل لوحة تعرض بتركيز التعرض لاسم المركب ، ورقم النسخ المتماثل. أضف ملليلترا واحدا من محلول التعرض إلى كل لوحة ، بدءا من أقل تركيز وقم بتدوير اللوحة برفق. بالنسبة للمركبات ذات الذوبان المنخفض ، استبدل 10 ملليلتر كاملة من الوسط بمحلول التعرض.

سجل التسلسل الذي أضيفت فيه المحاليل المركبة إلى الأجنة ، ثم احتضان الألواح في الغرفة الرطبة داخل حاضنة عند 28.5 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. لبدء اختبار ذهول الاهتزاز ، قم بتشغيل الكمبيوتر وجهاز الاهتزاز. أنشئ جدول بيانات لملف الإعداد.

قم بتضمين معلومات التعرض لكل موضع من مواضع اللوحة الخمسة ، مع تحديد المركب والتركيز والتكرار. افتح واجهة المستخدم العامة ، أو برنامج واجهة المستخدم الرسومية ، لمجموعة مقايسة اهتزاز الاهتزاز. حدد مواضع مختلفة في برنامج واجهة المستخدم الرسومية للتحقق من حركة الكاميرا ومراقبة استجابة الكاميرا.

قم بإزالة لوحة العينة من الحاضنة. ضعها في المواضع الخمسة المحددة واترك الأجنة تستقر لعدة دقائق. في برنامج واجهة المستخدم الرسومية ، انقر فوق تسجيل وستظهر النافذة الجديدة.

في هذه النافذة ، حدد ملف التكوين الذي تم إعداده مسبقا. تحقق من تطابق وصف العينة مع العينات الموجودة في كل موضع. لاحظ تشغيل مؤشر LED عند تنشيط نبض الصوت بواسطة البرنامج.

بعد التسجيل ، ستعود الكاميرا إلى الموضع الأول ، ويبدأ البرنامج في ضغط الملفات. استبدل العينات المقاسة بالمجموعة التالية وتابع التشغيل التالي كما هو موضح. ثم اجمع محاليل التعرض من جميع اللوحات المقاسة ، باستخدام غربال للاحتفاظ بالأجنة في وقت واحد.

لبدء تحليل البيانات ، افتح بيانات الفيديو باستخدام الدبلجة الافتراضية أو برنامج عرض آخر. سجل بصريا عدد الأجنة التي تستجيب لنبض الصوت. سجل اسم المركب، والتكرار، وتركيز المركب، والنسبة المئوية للأجنة المتحركة في جدول البيانات.

قم بإجراء تحليل التركيز المعياري باستخدام سير عمل KNIME مع البرامج النصية R المضمنة. أظهر تقييم عدم الحركة في الأجنة البرية غير المعالجة متوسط حركة بنسبة 14.33٪ عند تعرضها لمحفز الاهتزاز ، مع اختلافات عبر قوابض مختلفة. أظهرت حسابات التركيز المعياري لتأثيرات Tricaine على الحركة انخفاضا في الحركة عند تركيز 1٪ ، وتوقف النشاط فوق 2.5٪ مع تركيز قياسي 50 من 164.9 ميكرومولار.

أظهر مثال فحص دون المستوى الأمثل تناقضات في استجابات الجنين ، مما يعني وجود مشكلات تنموية تؤثر على قوة الاستجابة المفاجئة.