الاستزراع في المختبر لعينة الرواسب البيئية لنمو الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية

للبدء ، ضع زجاجة معقمة من النيتروجين وزجاجات الثقافة ، وزجاجة جمع العينات. قم بتقطير الإيثانول بنسبة 100٪ على السدادات وأشعل النار فيها باستخدام ولاعة. بمجرد توقف السدادات عن الاشتعال ، أدخل حقنة سعة ملليلتر واحدة مزودة بإبرة قياس 23 في زجاجة النيتروجين واسحب ما يقرب من ملليلتر واحد من النيتروجين.

استخرج الإبرة واضغط ببطء على المكبس لتحرير النيتروجين. أدخل الإبرة على الفور في زجاجة جمع العينات وارسم 0.5 ملليلتر من العينة البيئية. قم بتلقيح العينة المسحوبة في زجاجة الثقافة التي تحتوي على وسائط.

قم بتدوير الزجاجة برفق ووضعها في حاضنة عند درجة الحرارة المطلوبة. كان عدد الخلايا المباشر قبل التلقيح في كثير من الأحيان أقل من حد الكشف. بعد التلقيح ، زاد عدد الخلايا بأكثر من 10 ملايين خلية لكل ملليلتر في الأيام 30 و 37 و 44.

على الرغم من أن عدد الخلايا كان أقل من حد الكشف قبل إضافة اللقاح ، إلا أن NGS أشار إلى وجود قاعدي للكائنات الحية الدقيقة قبل التلقيح في الرواسب وكان الجنس الرئيسي geobacillus مستقرا في الأيام الثامنة و 15 و 22. بعد التلقيح بلقاح BLM-1 في اليوم 23 ، لم تعد geobacillus مهيمنة ، ونشأت أجناس رئيسية جديدة جنبا إلى جنب مع العديد من الأجناس الموجودة بشكل طفيف.