تصوير أحادي الجزيء للبروتينات الموسومة بالهالة لدراسة تفاعلات البروتين والمكثفات

1 للبدء ، احصل على خلايا صبغة الترابط2 تعبر عن البروتين ذي العلامات الهالية ذات الأهمية والهالة H2B. 3 بعد تشغيل نظام المجهر ، 4 اضبط معلمات حضانة الخلايا الحية 5 واترك النظام يوازن. 6 ضع قطرة من الزيت على 7 هدف TIRF 100x على المجهر 8 وقم بتحميل عينة الخلية على مرحلة المجهر.

9 لتحديد خلية سليمة شكليا ، 10 اضبط الموضع Z 11 وقم بتصوير عينة الخلية تحت إضاءة المجال الساطع. 12 قم بقص مجال الرؤية لالتقاط نواة الخلية المستهدفة. 13 باستخدام إضاءة الليزر ، اضبط زاوية TIRF 14 لتحقيق إضاءة hilo مع نسبة إشارة 15 إلى ضوضاء مثالية لجزيء واحد.

16 ثم اضبط وقت التعريض الضوئي على 500 مللي ثانية. 17 خلال الوقت الميت بين الإطارات ، قم بتنشيط 18 صورة الجزيئات 19 بشعاع 111 ميكرووات 405 نانومتر ، 20 وأثناء كل تعرض ، قم بإثارة جزيئات هالة H2B 21 بشعاع 9.1 مللي واط 640 نانومتر. 22 ابدأ التقاط الصور ل 2000 إطار بشكل مستمر 23 وقم بزيادة قوة شعاع 405 نانومتر 24 تدريجيا عند تقليل الجزيئات المنشطة ضوئيا.

25 للحصول على بروتين ذو علامة هالة ذات أهمية ، 26 أطوال موجية انبعاث مقسمة بين كاميرتين 27 باستخدام مرآة ثنائية اللون طويلة المرور. 28 إلى نفس معلمات الاقتناء الموضحة سابقا ، 29 تضيف قناة JFX549 للحصول على رتل واحد كل 10 ثوان 30 والتقاط 2000 رتل باستمرار.