1 للبدء ، قم بإجراء تصوير خليةحية 2 لجزيء واحد لمكثفات بروتين HaloTag. 3 باستخدام ImageJ ، قم بتحويل كل قناة 4 من ملف بيانات التصوير الخام 5 إلى ملف TIFF مستقل. 6 إذا لزم الأمر ، قم بتشغيل مشط التتبع المسبق.
أرسل رسالة نصية 7 واتبع التعليمات 8 لاستبدال أي إطارات بأحدث الإطارات. 9 لتحميل الجزيء الفردي لملف الفيلم في SlimFast ، انقر 10 فوق التحميل ، متبوعا بمكدس الصور. 11 قم بتعيين معلمات التوطين 12 والاقتناء في إطار أوراق الخيارات المعنية.
13 تصور توطين جميع الجزيئات. 14 وباستخدام قفل الكل ، قم بإنشاء ملف يحتوي على التوطين 16 من جميع الجزيئات في كل إطار. 17 بعد ذلك ، انتقل إلى تحميل بيانات الجسيمات 18 وحدد SlimFast لتحميل الملف 19 بإعدادات الترجمة والاكتساب.
20 باستخدام تتبع الخيار والورقة ، 21 اضبط المعلمات لتوليد المسار. 22 انقر فوق gen traj لإنشاء ملف 23 يحتوي على مسارات جميع الجزيئات. 24 قم بتحميل الملف المتعقب للورقة في eval SPT 25 واضبط المعلمات 26 لتصفية المسارات التي تقل عن 2.5 ثانية.
27 باستخدام بيانات التصدير ، قم بإنشاء ملف 28 مع جميع المسارات التي تمت تصفيتها 29 تشغيل الإصدار الثاني من ماكرو ImageJ والنواة والنواة 30 وقناع المجموعة. نص, 31 عتبة جميع إطارات الفيلم اكتسبت 32 في قناة JFX549 لتوليد فيلم بفاصل زمني 33 مأهولة بالقناع الثنائي المتطور للوقت 34 تسليط الضوء على مواقع المكثفات.
35 استخدام تحويل ASCII التتبع البطيء CSS 3. M ، 36 إعادة تنسيق المسارات 37 وتشغيل إصدار التصنيف 4. M 38 لفرزها بناء على العمر 39 الذي يقضيه الجزيء في المكثف.
40 بعد ذلك ، باستخدام قطعة الأرض الإقامة hist CSS. M ، 41 يستخرج معدل التفكك المرصود 42 من الجزيئات المرتبطة على وجه التحديد 43 ومعدل التبييض الضوئي من البروتين الموجود في المكثفات 44 ذي الأهمية ومسارات H2B. 45 أخيرا ، احسب متوسط وقت الإقامة المصحح 46 من البروتين محل الاهتمام ، 47 مرتبطا على وجه التحديد بمكثفاته.
48 يظهر إطار من فيلم جزيء واحد بلونين 49 من TAF15 IDR-Halo-FTH1 إشارات 50 من النواة في كل من قنوات PA-JF646 و JFX549. 51 عند التجميع والفرز ، لوحظ 52 تمييزا واضحا للمسارات 53 من الجزيئات المكتشفة PA-JF646 المرتبطة بالمكثفات. 54 كان متوسط أوقات الإقامة المحسوبة 55 بعد تصحيح التبييض الضوئي 56 أكثر ل TAF15-Halo-FTH1 من Halo-TAF15.
