جمع البويضات وتحضيرها وحقنها المجهري في الماوس لدراسات التصوير الحي

ابدأ بترتيب جميع المواد المطلوبة للتجربة على منصة العمل. بعد استخراج المبايض من الفأر ، ضعها في وسط ألبومين M2 بالإضافة إلى مصل البقري الذي تم تسخينه مسبقا مع ميلرينون ميكرومولار واحد. ثقب بصيلات المبيض بالإبر الجراحية لإطلاق البويضات النامية من الجريبات الغارية.

باستخدام micropipette ، وجمع البويضات من الحجم اللازم للتجارب. ثم نقل البويضات إلى طبق مع وسط طازج. نقل البويضات من قطرة إلى قطرة باستخدام micropipette.

هذا يسمح بالتفكك الميكانيكي للبويضات من الخلايا المسامية الغارية. تثبيت البويضة لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. أجهزة الطرد المركزي حصص cRNA ، طلاء ل YFP-Rango و SRSF2 GFP.

باستخدام حاقن دقيق ، قم بحقن cRNA في سيتوبلازم البويضات في وسط ألبومين مصل M2 بالإضافة إلى الأبقار الدافئ ، مع استكمال ميلرينون. احتضان البويضات لمدة ساعتين في وسط مزرعة عند 37 درجة مئوية لترجمة cRNA. بعد ذلك ، قم بإيداع البويضات في قطرات متوسطة الثقافة على طبق زراعة الأنسجة 35 ملم مع غرفة سفلية زجاجية مغطاة بالزيت المعدني.