للبدء ، قم بتشغيل برنامج التصوير. افتح نافذة الاستحواذ. اضبط وقت التعرض للضوء على 500 مللي ثانية ، ومنطقة الكاميرا على شريحة كاملة ، و binning على شريحة واحدة ، ثم اضبط الإضاءة للقناة المطلوبة.
للتقليب السيتوبلازمي، استخدم الضوء المرسل للتركيز على نواة البويضة. بالنسبة لتجارب البقع النووية ، ركز على قطرات SRSF2 GFP. لتحسين سرعة الاكتساب، في علامة التبويب خاص، اضبط غالق الكاميرا على الفتح للتعريض الضوئي ووضع المسح على مسح التسلسل المسبق.
بعد ذلك ، افتح نافذة اكتساب البث. في علامة التبويب اكتساب، اضبط وضع الاكتساب على البث إلى ذاكرة الوصول العشوائي وعدد الإطارات على 480. اضبط معلمات الكاميرا للحصول على الصور بمعدل الإطارات ، وعدد الإطارات لتخطيها إلى الصفر.
في علامة التبويب معلمات وحدة التحكم في الكاميرا الرقمية، اضبط حالة الكاميرا على التوقف، ووضع الغالق على عدم الفتح أبدا، ووضع المسح على مسح التسلسل المسبق، وعدد الإطارات على متوسط إلى واحد. بعد ذلك ، اضبط منطقة الاهتمام حول الكائن. في نافذة اكتساب الدفق ، انقر فوق اكتساب لبدء تشغيل الفيلم.
بعد الاستحواذ ، احفظ الفيلم كملف tiff. لتحليل الصور ، افتح ImageJ أو فيجي. في المكونات الإضافية ، انقر فوق CIRB وافتح قائمة Verlhac ، ثم حدد شكل نواة البويضة.
في مربع الحوار ، حدد المجلد الذي يحتوي على الأفلام المراد تحليلها. ثم حدد زاوية ثيتا والهوامش للاقتصاص. الآن ، حدد معايرة XY والفاصل الزمني ، ثم انقر فوق OK.To رسم الشكل المتوسط بمرور الوقت ، في جدول البيانات ، احسب متوسط نصف القطر R على جميع النقاط الزمنية T لكل زاوية ثيتا محددة.
لكل T و theta ، اطرح متوسط نصف القطر R بمرور الوقت من نصف القطر الصغير r. أخيرا ، احسب متوسط التقلبات لجميع النقاط الزمنية T وجميع زوايا ثيتا لكل نواة وجميع النوى من حالة واحدة. في البويضات الضابطة ، أظهرت النواة تقلبات محيطية كبيرة كما هو موضح مع المسبار النووي YFP رانجو.
في المقابل ، ظلت النواة في البويضات ذات القوى الهيكلية الخلوية المعطلة مستقرة بمرور الوقت. كشف تباين المسافة من النواة المركزية إلى محيطها عن زيادة بمقدار ستة أضعاف في البويضات الضابطة مقارنة بتلك التي تعاني من قوى هيكلية خلوية معطلة. أظهرت البقع النووية في البويضات الضابطة تقلبا أكبر في أسطح القطيرات مقارنة بالقوى السيتوبلازمية المعطلة.
