لبدء طلاء المستضد ، قم بتخفيف البومين البيضاوي إلى خمسة ميكروغرام لكل ملليلتر باستخدام عازل طلاء. قم بتغطية صفيحة ELISA 96 جيدا ب 100 ميكرولتر من محلول البومين البيضاوي لكل بئر بين عشية وضحاها عند أربع درجات مئوية. في اليوم التالي ، اغسل الآبار خمس مرات باستخدام PBST.
سد الآبار ب 250 ميكرولتر من 1٪ BSA PBST عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. لتحضير تخفيف مصل 1000 X ، قم أولا بتخفيف 20 ميكرولتر من المصل إلى ملليلتر واحد باستخدام 0.5٪ BSA PBST. ثم قم بإزالة 25 ميكرولتر من قسمة المصل وقم بتخفيفها إلى 500 ميكرولتر باستخدام 0.5٪ BSA PBST.
أضف 200 ميكرولتر من المصل المخفف إلى 1000 X إلى الصف الأول من اللوحة المطلية. ثم أضف 100 ميكرولتر من 0.5٪ BSA PBST إلى جميع الآبار باستثناء الآبار في الصف الأول. نقل 100 ميكرولتر من الصف الأول إلى الصف الثاني ، وتخلط 10 مرات.
لإنشاء تركيزات متفاوتة من المصل للكشف عن IgG ، تخلص من 100 ميكرولتر من السائل من الصف الأخير. بعد ذلك ، قم بتخفيف غسل المهبل للفئران ، وغسل الشعب الهوائية السنخية ، وسوائل غسل الأنف بنسبة 0.5٪ BSA PBST وسائل غسل الأمعاء الدقيقة مع 20٪ مصل العجل الجنيني PBST. احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة.
اغسل الآبار خمس مرات باستخدام PBST. أضف 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة للماعز المترافق HRP إلى الآبار المناسبة واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة. بعد غسل الآبار خمس مرات باستخدام PBST ، أضف 100 ميكرولتر من ركيزة TMB ELISA واحتضانها في منطقة محمية خفيفة لمدة خمس دقائق.
أضف 100 ميكرولتر من محلول توقف 450 نانومتر لإنهاء التفاعل. قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر على قارئ الصفائح الدقيقة. احسب عيار الجسم المضاد الذي يحدد قيمة الاستجابة الإيجابية على أنها 2.1 ضعف قيمة مصل مجموعة الماوس الضابطة.
زاد اللقاح المساعد لمستحلب النانو بشكل كبير من عيار الأجسام المضادة IgG و IgG1 و IgG2a المحدد بالبيضاوي في المصل. تم تعزيز مستويات IgA المحددة في سائل غسل المهبل وسائل غسل الأمعاء الدقيقة بشكل كبير عندما تم إضافة البيضاوي مع حمض الريتينويك المغلف بمستحلب النانو الموجبة .
