عزل الخلايا المفردة من عضويات الدماغ البشري لتسلسل الحمض النووي الريبي أحادي الخلية

للبدء ، اجمع ما يصل إلى خمسة عضويات دماغية بشرية متولدة من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات في بئر واحدة من صفيحة ستة آبار. نضح وسائط الثقافة الزائدة ، واغسل المواد العضوية مرة واحدة باستخدام برنامج تلفزيوني. باستخدام مشرط ، فرم المواد العضوية جيدا.

أضف مزيج الإنزيم إلى المواد العضوية المفرومة ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 20٪ أكسجين و 5٪ ثاني أكسيد الكربون عند 90 دورة في الدقيقة لمدة 10 إلى 15 دقيقة. امزج التعليق العضوي باستخدام طرف ماصة 1000 ميكرولتر. ثم يضاف مزيج الإنزيم اثنين ، ويحتضن عند 37 درجة مئوية لمدة 10 إلى 15 دقيقة.

توقف عن التفكك بإضافة 10 ملليلتر من محلول التوقف. قم بتصفية تعليق الخلية على مصفاة خلية 70 ميكرون. أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية المفلترة عند 300 جرام لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية.

نضح المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في أربعة ملليلتر من البرد 0.04٪ BSA. الآن قم بتصفية تعليق الخلية على مصفاة خلية 40 ميكرون ، وعد الخلايا على عداد الخلية. قم بطرد مركزي الكمية المطلوبة من تعليق الخلية ، ونضح المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في NSB plus medium وفقا لدليل مجموعة scRNA-Seq القائم على الموائع الدقيقة.