للبدء ، ضع الماوس الرحيم على المنصة الجراحية. استخدم المقص الجراحي لإزالة جفونه بدقة. ثم بمساعدة ملاقط منحنية ، قم بالضغط برفق على جوانب متقابلة من مقبس العين ، مما يتسبب في بروز العين للخارج.
استخدم سكين إعتام عدسة العين لعمل شق دقيق على القرنية واستخدم ملاقط منحنية لاستخراج العدسة بعناية. بعد ذلك ، باستخدام ملاقط منحنية ذات أطراف حادة ، انقل العدسات إلى طبق ثقافة بلاستيكي 60 ملم يحتوي على خمسة ملليلتر من DPBS المعقمة والجنتاميسين. اشطف العدسات برفق بمحلول DPBS الذي يحتوي على جنتاميسين.
بعد الانتهاء من عملية الشطف ، ضع العدسة على قطعة من ورق الترشيح واتركها حتى تجف. بمجرد أن تجف العدسة بشكل كاف ، انقلها بعناية إلى غطاء طبق بتري للتحضير لإزالة كبسولة العدسة. ثم قم بتدوير العدسة لأعلى ، مع التأكد من أن الجزء الأمامي متجها لأعلى.
أثناء إمساك الكبسولة الأمامية بملاقط ، استخدم ملقط المحفظة في اليد المهيمنة لإحداث تمزق صغير. اسحب الأداتين برفق في اتجاهين متعاكسين لإزالة الكبسولة. ضع الكبسولة في DPBS حتى يتم الانتهاء من تشريح العدسة.
بعد ذلك ، انقل كبسولة العدسة بعناية إلى لوحة من ستة آبار. أضف ملليلتر واحد من محلول التربسين 0.05٪ إلى كل بئر لبدء عملية الهضم الأنزيمي. حرك محلول التربسين برفق لضمان التغلغل المتساوي.
ضع الطبق في حاضنة زراعة الخلايا واترك الكبسولة تهضم لمدة ثماني إلى 10 دقائق عند 37 درجة مئوية. ثم استخدم مقص التشريح لفرم كبسولة العدسة المهضومة بعناية لتعزيز فصل الخلايا. أضف 0.5 ملليلتر من وسط الاستزراع الذي يحتوي على 10٪ FBS لإخماد التربسين.
نقل عينات الأنسجة إلى أنبوب الطرد المركزي وأجهزة الطرد المركزي عند 1000 G لمدة خمس دقائق. قم بإزالة المادة الطافية بعناية دون إزعاج حبيبات الخلية. استخدم ملليلتر واحد من وسط الاستزراع لإعادة تعليق الخلايا وزرع الخلايا في طبق من 24 بئرا.
أظهرت صورة التباين المرحلي للخلايا الظهارية ذات العدسة المستزرعة أنه بين اليوم الثالث والخامس ، بدأت الخلايا مرحلة انتشارها. ويمكن ملاحظة مراحل النمو السريع والانتشار اللوغاريتمي بين اليوم السابع واليوم 10.
