معالجة الأنسجة الدهنية البنية فوق الترقوة لتلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين

1 ابدأ بوضع2 قارورة التلألؤ الزجاجية التي تحتوي على 3 scBAT الخاص بالماوس في PBS على طاولة العمل. 4 استبدل PBS ب 10 مل من البرد ، 5 4٪ بارافورمالدهايد. 6 ضع القارورة على المغذي ، 7 هزاز عند أربع درجات مئوية طوال الليل 8 لإصلاح scBAT.

9 في اليوم التالي ، استبدل محلول بارافورمالدهيد 10 ب 10 إلى 15 مل من PBS. 11 ضع القارورة على مغذيات 12 وصخورها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. 13 استبدل PBS ب 0.85٪ محلول ملحي 14 واستمر في التأرجح لمدة 30 دقيقة أخرى.

15 ثم استبدل المحلول الملحي ب 10 ملليلتر 16 من 70٪ الإيثانول ، 0.85٪ محلول ملحي. 17 قم بتخزين القارورة في ثلاجة بأربع درجات طوال الليل 18 أو حتى تصبح جاهزة لتضمين البارافين. 19 في اليوم التالي ، قم بإزالة خليط الإيثانول الملحي بنسبة 70٪ 20 من القارورة وأضف 10 إلى 15 مل 21 من الكحول المجفف بنسبة 95٪.

22 هز القارورة على المغذيات في درجة حرارة الغرفة 23 لمدة ساعة واحدة. 24 بعد الغسيل الثاني ، أضف 10 إلى 15 مل 25 من الكحول المجفف بنسبة 100٪ 26 واستمر في التأرجح على المغذيات لمدة ساعة واحدة. 27 لمسح scBAT للتضمين ، أضف 10 مل من التولوين 28 إلى القارورة واستمر في التأرجح على المغذي 29 حتى يصبح scBAT شفافا.

30 ثم قم بتضمين scBAT في شمع البارافين. 31 قسم scBAT باستخدام ميكروتوم 32 وتابع تلطيخ الهيماتوكسيلين واليوزين. 33 أكد تلطيخ الهيماتوكسيلين واليوزين 34 أن scBAT يتكون من هياكل نسيجية مميزة 35 من الأنسجة الدهنية البنية ، 36 بما في ذلك العديد من الخلايا الشحمية الصغيرة متعددة النواقل 37 في كل من الفئران بعد الولادة والفئران البالغة.