زراعة الخلايا 3D للخلايا الجذعية المشتقة من الدهون في الهلاميات المائية لزيادة النمو

لبدء نقل 44 ملليلتر من الوسط القاعدي إلى أنبوب طرد مركزي 50 ملليلتر. أضف 5 ملليلتر من 10٪ FBS إلى الوسائط. ثم ماصة 0.5 ملليلتر من كل من البنسلين الستربتومايسين والأمفوتريسين B محاليل المضادات الحيوية.

جهاز طرد مركزي قارورة تحتوي على محلول Dexstran سريع عند 1000 جرام لمدة 30 ثانية عند 20 درجة مئوية. أضف 175 ميكرولترا من الماء إلى القارورة للحصول على تركيز نهائي قدره 30 ملليمول لكل لتر. دوامة الأنبوب لمدة 30 ثانية على سرعة متوسطة حتى تذوب المادة بالكامل.

احتضان المواد المذابة على الجليد لمدة خمس دقائق. جهاز طرد مركزي الأنبوب قبل دوامة محتوياته مرة أخرى. ثم ضع الأنبوب على الثلج حتى استخدامه مرة أخرى.

بعد ذلك ، أجهزة الطرد المركزي crosslinker لتركيز المواد. ماصة 188 ميكرولتر من الماء إلى قارورة crosslinker لتحقيق تركيز نهائي من 20 ملليمول لكل لتر من مجموعات الثيول. دوامة حل crosslinker حتى يتم إذابة جميع المواد.

أجهزة الطرد المركزي الأنبوب بعد الحضانة. ثم دوامة لفترة وجيزة قبل وضعها في درجة حرارة الغرفة حتى استخدام آخر. بعد ذلك ، قم بإعداد معلق الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون ل 10 ميكرولتر من الهيدروجيل كما هو موضح في الجدول لإنشاء مزيج رئيسي.

انقل تسعة ميكرولترات من المزيج الرئيسي إلى بئر في لوحة شريط بئر 96. بعد ثلاث دقائق ، أضف ميكرولتر واحد من الرابط المتشابك القابل للتحلل إلى المزيج لتصلب الجل. ماصه. 170 ميكرولتر من وسائط الاستزراع الكاملة الدافئة مسبقا فوق الهلاميات المائية.

استبدل وسط الثقافة بعد الحضانة.