للبدء ، استخدم قلم رصاص ماسي لتقسيم غطاء زجاجي قياسي إلى ثلاثة شرائح متساوية. استخدم شحم الفراغ للصق قطعة من شريط انزلاق الغطاء في الجزء السفلي من حامل الحجرة محلي الصنع. وبالمثل ، قم بتوصيل القطعة الثانية من شريط انزلاق الغطاء بالجزء العلوي من حامل الحجرة.
بعد ذلك ، استخدم مسدس ماصة لحقن 200 ميكرولتر من تعليق RBC المسمى بين زلتي الغطاء. لتجميع إعداد شفط الماصة الدقيقة ، قم بتركيب حجرة الخلية على مرحلة الحامل على منصة المجهر. اضبط موضع الغرفة حتى تصبح أقل من الهدف مباشرة.
الآن قم بخفض الحامل حتى يصبح أقل من مستوى السائل في خزان المياه المتصل. قم بحقن الماء منزوع المعادن في الماصة الدقيقة ، ثم استخدم حقنة مزودة بإبرة قياس 34 لإزالة أي فقاعات هواء. قم بفك طرف حامل الماصة الدقيقة في منتصف الطريق واترك الماء يقطر من الحامل لبضع ثوان.
بعد ذلك ، أدخل الماصة الدقيقة المملوءة بالتعليق في طرف الحامل وشد برغي الحامل. ضع الماصة الدقيقة في حجرة الخلية. ثم حدد موقع الماصة وكرات الدم الحمراء تحت المجهر.
اخفض طرف الماصة للتأكد من تسويته مع كرات الدم الحمراء الموجودة. اضبط ارتفاع خزان المياه على صفر الضغط الهيدروليكي عند الطرف. ثم ارفع خزان المياه قليلا لتوليد ضغط إيجابي خفي.
قم بتشغيل مصدر ضوء الإثارة الفلورية 488 نانومتر. قم بتشغيل كاميرا الفلورسنت والكاميرا المرسلة. أدخل وقت التعرض ومنطقة الاهتمام وحجم binning لكلتا الكاميرتين في البرنامج المقابل.
بعد ذلك ، قم بإعداد رقم الاستحواذ إلى 2000 ضمن لوحة الاستحواذ متعدد الأبعاد. اختر دليل الحفظ المطلوب. بعد ذلك ، حدد موقع micropipette بمساعدة micromanipulator.
قم بتشغيل مشبك الضغط الهوائي وتأكد من أن صندوق التحكم في الوضع الخارجي. قم بتدوير المقبض ببطء لتعويض أي ضغط إزاحة داخل النظام. قم بتشغيل البرنامج الذي يتحكم في المشبك الهوائي.
استخدم لوحة التحكم الكهربائية للحفاظ على التحكم في الضغط بمعامل تحويل زئبقي 20 مللي فولت لكل ملليمتر. الآن قم بتصفير الضغط داخل النظام ، ثم انقل الماصة الدقيقة بعناية بالقرب من كرات الدم الحمراء. اضبط موضع خزان المياه لتوليد ضغط إيجابي دقيق عند طرف الماصة الدقيقة.
ابدأ عملية الاستحواذ في برنامج الكاميرا وقم بتشغيل الغالق الفلوري. اكتب حجم الجهد المحسوب في لوحة التحكم للوصول إلى الضغط المطلوب ونضح كرات الدم الحمراء. استمر في الضغط لفترة محددة مسبقا ، ثم حرره.
وبالمثل ، كرر التجربة مع RBC التالي قبل إجراء مزيد من التحليل. أدت الزيادة المتزايدة في الضغط إلى زيادة تعبئة أيونات الكالسيوم في كرات الدم الحمراء.
