تحضير الخلايا ذات الكفاءة الكهربائية لتحقيق التعبير الجيني أحادي النسخة في سلالة بكتيرية تعاني من نقص التدفق

للبدء ، ضع جميع أنابيب الميكروفوج المعقمة سعة 1.5 ملليلتر وأوعية التثقيب الكهربائي المعقمة على الجليد. ثم ضع زجاجة الماء المعقم ، التي تم تخزينها عند أربع درجات مئوية ، على الثلج. نقل 1.5 ملليلتر من الثقافة البكتيرية بين عشية وضحاها إلى واحدة من أنابيب microfuge 1.5 ملليلتر وأجهزة الطرد المركزي في 13،000 غرام لمدة دقيقتين لحبيبات الخلايا.

باستخدام ماصة ملليلتر واحد ، قم بإزالة كل المادة الطافية دون إزعاج حبيبات الخلية. أضف 1.5 ملليلتر أخرى من الثقافة البكتيرية إلى نفس أنبوب microfuge ، جهاز طرد مركزي عند 13،000 جم لمدة دقيقتين وإزالة المادة الطافية. أضف ملليلترا واحدا من الماء المثلج البارد والمعقم إلى حبيبات الخلية وأعد تعليقها بسحب لطيف حتى تختفي الحبيبات في قاع أنبوب microfuge.

أجهزة الطرد المركزي الخلايا المعاد تعليقها عند 13،000 غرام لمدة دقيقتين ، وإزالة المادة الطافية بعناية باستخدام ماصة ملليلتر واحد. أعد تعليق حبيبات الخلية النهائية برفق في 200 ميكرولتر من الماء البارد والمعقم ، وانقل 100 ميكرولتر من تعليق الخلية النهائي إلى أنبوب microfuge الثاني الجليدي البارد 1.5 ملليلتر.