قم بتسخين ملليلتر واحد من مرق LB ولوحة أجار LB بالإضافة إلى الجنتاميسين لكل عينة والتحكم في حاضنة ثابتة مضبوطة على 37 درجة مئوية. في حجم مجمع من خمسة ميكرولتر أو أقل ، أضف 100 إلى 200 نانوجرام لكل من البلازميد المساعد pTNS2 وبلازميد إدخال الجنتاميسين adeIJK pUC18-Tmini-Tn7-Tlac إلى حصة من الخلايا ذات الكفاءة الكهربائية. امزجه بنقرة لطيفة بأطراف الأصابع لضمان الخلط الكامل للبلازميدات مع الخلايا المختصة كهربائيا دون إدخال فقاعات.
أضف حجما مكافئا من الماء المقطر المعقم إلى قسمة خلية التحكم السلبية واخلطها برفق كما هو موضح من قبل. احتضان العينات على الجليد لمدة 20 دقيقة. انقل عينة الخلية بأكملها إلى كوفيت التثقيب الكهربائي البارد بالثلج ، ثم ضع الكوفيت مرة أخرى على الثلج.
لإلكتروب عينة الخلية ، قم بتشغيل جهاز الحفر الكهربائي واضبطه على كيلوفولت. امسح سطح الكوفيت بمنديل رخو لإزالة أي ثلج أو رطوبة ملتصقة. أدخل الكوفيت في جهاز الحفر الكهربائي وقم بتوصيل الصدمة الكهربائية.
أضف على الفور 0.9 ملليلتر من مرق LB المسخن مسبقا إلى الخلايا الموجودة في كوفيت ، وماصة بلطف لأعلى ولأسفل لخلط الخلايا مع الوسائط. انقل معلق الخلية بالكامل إلى أنبوب ميكروفوج جديد سعة 1.5 ملليلتر في درجة حرارة الغرفة. ثم تحقق من قيمة الوقت الثابت على الكهربائي.
للحصول على أفضل النتائج ، يجب أن تكون هذه القيمة بين أربعة وستة. احتضان العينات الكهربية عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة عند 250 دورة في الدقيقة للسماح باستعادة الخلايا. بعد ساعة ، انشر 100 ميكرولتر من كل عينة على صفيحة أجار LB plus gentamicin تم تسخينها مسبقا ، باستخدام موزع التلقيح.
احتضان الألواح عند 37 درجة مئوية لمدة 16 إلى 18 ساعة. تحقق من لوحات التثقيب الكهربائي. باستخدام أعواد أسنان معقمة ، التقط ما يصل إلى 10 مستعمرات مفردة من ألواح أجار LB plus gentamicin وقم بتصحيحها على صفيحة أجار LB plus gentamicin جديدة.
احتضان الألواح عند 37 درجة مئوية لمدة 16 إلى 18 ساعة. يحافظ ترقيع مستعمرات لوحة التحويل على وسائط انتقائية على السلالة المحولة ويوفر مادة أولية لفحص PCR للمستعمرة. منتج PCR لبادئات الفحص ، ABglmS2 إلى الأمام الجديد ، وعكس Tn7 هو 382 زوجا أساسيا.
تشمل الضوابط السلبية للتفاعل النوع البري A.baumannii ATCC 17978 و AB 258 ولا يوجد قالب.
