بعد زراعة فطر Aspergillus flavus NRRL 3357 الأفلاتوكسيجينيك على مثقاب سكر العنب للبطاطس لمدة ستة أيام عند 30 درجة مئوية ، قم بسحب الجراثيم الفطرية من أنبوب الاختبار ب 10 ملليلتر من الماء الذي يحتوي على Tween 20. دوامة أنبوب الاختبار لمدة 20 ثانية. قم بتصفية تعليق البوغ الفطري من خلال الصوف الزجاجي الموضوع في قمع ، واستخدم المرشح الدوامي للتخفيف.
تمييع حصص 100 ميكرولتر من التعليق المصفى مع 9.9 ملليلتر من الماء. بعد الدوامة ، عد الجراثيم باستخدام مقياس الدم. باستخدام الصيغة التي تظهر على الشاشة ، احسب حجم الماء اللازم لتخفيف حجم واحد من المعلق الأصلي من الميل إلى 1000 جراثيم لكل ميكرولتر.
أضف حجما واحدا من التعليق الأصلي إلى كمية الماء المحسوبة. بعد ذلك ، قم بتكسير قرون الفول السوداني برفق وإزالة الهياكل. ضع البذور في دورق معقم.
أضف 0.05٪ من محلول بيروكسيد الهيدروجين حتى تمتلئ الكأس الزجاجية بنسبة 70٪ ، مما يسمح للبذور بشرب الماء لمدة ثلاث ساعات. صب محلول بيروكسيد الهيدروجين من البذور وأضف ما يقرب من ثلاثة أضعاف كمية خليط الماء 80٪ من الإيثانول لتغطية البذور. احتضان لمدة دقيقة واحدة.
ثم شطف البذور مرتين بكميات متساوية من الماء المقطر المعقم. أضف الحجم الخماسي لمحلول بيروكسيد الهيدروجين 3٪ إلى الكأس الزجاجية واتركه يقف لمدة خمس دقائق. بعد صب محلول بيروكسيد الهيدروجين ، اشطف البذور مرتين بكميات متساوية من الماء المعقم.
ضع ورق ترشيح بقطر 90 مم في الغطاء ورطب الورق بملليلتر واحد من الماء المعقم. ضع الغطاء على الطبق. ضع البذور على منشفة ورقية معقمة.
باستخدام ملقط ، قم بإزالة جلد البذور. ضع البذور منزوعة الجلد على الفور في طبق بتري لتجنب الجفاف. قطع حوالي ثلث البذور التي تحتوي على المحور الجنيني.
قسم البذور إلى فلقات ، وباستخدام مثقاب حاد ، قم بحفر ما يقرب من 1.5 إلى 2 ملليمتر في منتصف الجانب الخارجي لكل نبتة. ضع أربع إلى ست قطع محفورة من البذور على طبق مثقاب 1.5٪. باستخدام ماصة 10 ميكرولتر ، أضف 2 ميكرولتر من تعليق البوغ في التجويف المحفور لكل نصف قطعة نبتة.
بعد تغطية الطبق بغطاء ، احتضان عند 30 درجة مئوية دون ضوء لمدة 72 ساعة.
