بعد حضانة بذور الفول السوداني ، بعد تلقيح بوغ Aspergillus flavus ، استخدم ملقط لإزالة قطع البذور من الآجار. ضع قطع البذور في قارورة من الخرز سعة سبعة ملليلتر تحتوي على 13 حبة سيراميك زركونيوم. لاستخراج phytoalexins و aflatoxins ، اعتمادا على حجم البذور ، أضف ملليلتر أو أربعة ملليلتر من خليط ماء الميثانول إلى قارورة الخرزة وسحقها بسرعة 5.5 متر في الثانية لمدة 45 ثانية.
ثم أجهزة الطرد المركزي في 1،860 × غرام لمدة ثلاث دقائق ، وجمع طاف في قارورة جديدة. لتحليل الأفلاتوكسينات ، باستخدام قضيب زجاجي ، مقطوع بزاوية 90 درجة ، أدخل فريت مسامي من البولي إيثيلين في عمود بولي بروبيلين 1.5 ملليلتر. باستخدام مغرفة مصنوعة حسب الطلب ، أضف 50 ملليغرام من هلام السيليكا المغنيسيوم إلى العمود.
قم بتغطية العمود بقضيب متطابق وادفعه لأسفل بقضيب زجاجي. أضف 0.5 ملليلتر من المادة الطافية إلى العمود الصغير المعبأ حسب الطلب واترك المستخلص يستنزف عن طريق الجاذبية في قنينة زجاجية سعة أربعة ملليلترات. أضف ملليلتر واحد من خليط ماء الميثانول إلى العمود لغسل الشوائب عن طريق الجاذبية في نفس القارورة.
بعد التخلص من الشطف المشترك من القارورة ، أضف 1.2 ملليلتر من ماء الأسيتون أسيتيل النتريل ، 88٪ خليط حمض الفورميك في العمود لاستخلاص جزء الأفلاتوكسين في قنينة زجاجية نظيفة. يتبخر المذيب من القارورة في تيار من النيتروجين في كتلة تسخين عند 45 درجة مئوية. بعد التبخر ، قم بتغطية القارورة وتبريدها في نرد مطحون لمدة دقيقة واحدة.
ضع مرشحات ماصة باستور المصنوعة حسب الطلب في أنابيب اختبار يمكن التخلص منها وضعها على الجليد لتقليل التبخر عند الترشيح. قم بإذابة البقايا الجافة بدقة 0.25 إلى 1.0 ملليلتر من خليط ماء الميثانول. بعد الدوامة ، قم بنقل حصصة 0.2 ملليلتر إلى الفلتر.
استخدم غاز النيتروجين لتسريع الترشيح في قارورة أخذ العينات الأوتوماتيكية سعة 400 ميكرولتر. ضع القارورة في آخذ العينات الأوتوماتيكي UPLC واضبط حجم الحقن على 0.1 إلى 3.0 ميكرولتر. بالنسبة إلى phytoalexin ، انقل 200 ميكرولتر من المادة الطافية من قارورة الطرد المركزي سعة سبعة ملليلتر إلى مرشح ماصة باستور.
بعد الترشيح ، ضع غطاء مطابقا مع حاجز بولي تترافلوروإيثيلين على القارورة. لفصل الأفلاتوكسينات ، قم بتنفيذ تدرج باستخدام الماء والميثانول ونتريل الأسيتيل مع تركيبات وأوقات تشغيل محددة النسبة المئوية. اضبط معدل التدفق على 0.45 ملليلتر في الدقيقة ووقت التشغيل على 9.5 دقيقة.
في سخان عمود النظام ، اضبط درجة حرارة العمود على 40 درجة مئوية. لتحديد كمية الأفلاتوكسينات ، اضبط الأطوال الموجية للإثارة والانبعاث على 362 و 440 نانومتر على التوالي. ثم باستخدام طريقة منحنى المعايرة ودليل برنامج UPCL ، قم بإجراء التحليل لتحديد تركيزات الأفلاتوكسين في عينات الاختبار.
لفصل stilbenoids ، استخدم تدرجا يتكون من الماء والميثانول و 88٪ حمض الفورميك مع ظروف وأوقات مئوية محددة. اضبط معدل التدفق على 0.5 ملليلتر في الدقيقة ووقت التشغيل على 12 دقيقة. باستخدام طريقة منحنى المعايرة ، حدد تركيزات stilbenoids وقارن مناطق الذروة لعينة الاختبار بمعايير نقية وأصلية.
تحقق طريقة القياس الكمي للأفلاتوكسين القائمة على UPLC تقديرا كميا حساسا للأفلاتوكسين B1 بحد أقصى اثنين بيكوجرام لكل حقنة. أظهر المستخلص المنقى للبذور التي تم حصادها من أنواع الأريكا البرية تقديرا لا لبس فيه للأفلاتوكسينات. يزيل نهج عمود هلام السيليكا المغنيسيوم الشوائب بشكل فعال من جزء الأفلاتوكسين ويوضح كفاءة عالية في القياس الكمي على عكس الطرق السابقة.
بالإضافة إلى ذلك ، تساعد هذه الطريقة أيضا في تحديد كمية فيتواليكسين الفول السوداني.
