حصاد أنسجة المخ والتشريح بالتبريد والتصوير بعد الجراحة التجسيمية في الفئران

للبدء ، حرر الفأر المحقون بالصبغة الزرقاء بروموفينول من الإطار المجسم. بعد التخدير ، قم بتأمين الماوس على لوح رغوي بشريط. قم بعمل شق من ملليمتر إلى ملليمترين في الزائدة الأذينية اليمنى.

أدخل إبرة التسريب في البطين الأيسر. غرست 20 ملليلتر من محلول ملحي مبرد مسبقا ، تليها 20 ملليلتر من محلول بارافورمالدهايد المثلج 4٪. الآن قم بعمل شق على طول خط الوسط من الرقبة إلى الأنف لإزالة الجلد وفضح الجمجمة.

استخدم ملقط أو مقص لإزالة العضلات المتبقية على الجمجمة. ضع طرف شفرة واحدة من المقص الناعم بين الثقبة العظمى والدماغ مع حافة حادة تواجه العظم في الطرف المنقاري من الخيط السهمي. حرك بلطف وقطع الجمجمة على طول خياطة منتصف السهمي.

استخدام ملقط لإزالة الجمجمة ، وفضح الدماغ. بعد تشغيل جهاز التبريد microtome الدوار ، اضبط درجة حرارة الغرفة على 20 درجة مئوية تحت الصفر. صب القليل من درجة حرارة القطع البصري ، أو مركب OCT ، لتغطية سطح قرص العينة بالتساوي.

ضع قرص العينة في غرفة التبريد واسمح ل OCT بالتصلب. قم بتوصيل القرص برأس العينة. بعد ذلك ، قرب الشفرة من الكتلة وقم بقص كتلة OCT لعمل مستوى مسطح مواز للقرص.

باستخدام شفرة الحلاقة ، قم بقطع الدماغ في اتجاه إكليلي بعيدا عن موقع الحقن ، في قالب شريحة الدماغ. ضع أنسجة المخ التي تحتوي على موقع الحقن ، مع الجانب المقطوع لأسفل ، على مستوى OCT المسطح. صب OCT على الدماغ ، وضع القرص في غرفة التبريد ، مما يسمح لكتلة العينة بالتصلب.

قم بقص كتلة العينة حتى تقترب المنطقة المستهدفة ، وقم بعمل عدة أقسام من مستوى موقع الحقن. استخدم فرشاة كتابة صغيرة مبردة لجمع شرائح الدماغ الإكليلي في طبق من ستة آبار يحتوي على برنامج تلفزيوني بدرجة حرارة الغرفة. باستخدام فرشاة ، التقط أقسام الدماغ من اللوحة الستة ووضعها على شريحة.

بعد التجفيف ، بصريا ، لاحظ المنطقة المحقونة في أقسام الدماغ.