الحقن المجهري المستهدف لمنطقة الدماغ لصبغة البروموفينول في الفئران

ابدأ بوضع الأدوات الجراحية المعقمة على مقعد العمل. لتأمين الماوس المخدر في الإطار التجسيمي ، قم بخلط القواطع العلوية بمشبك الأنف وقم بتثبيت الرأس بقضيبين للأذن. باستخدام مقص العين ، قم بعمل شق 0.5 سم على فروة الرأس لكشف الجمجمة.

باستخدام قطعة قطن مغموسة في 3٪ بيروكسيد الهيدروجين ، افرك الجمجمة المكشوفة لإزالة السمحاق. اترك الجمجمة حتى تجف. قم بتثبيت المثقاب على أداة التجسيم واضبط مقابض الذراع المجسمة.

بمساعدة المكبر ، ضع طرف الحفر بدقة عند bregma. سجل قيمة المحور Z في bregma باستخدام شاشة LCD الرقمية. الآن ، ضع طرف الحفر في لامدا وسجل قيمة المحور Z.

اضبط مشبك الأنف لتقليل الفرق بين قيمتي Z. ضع المثقاب عند الإحداثيات ناقص 5.2 ل X و زائد 0.8 ل Y لقياس قيمة المحور Z في الاتجاه البطني الظهري. أعد وضع المثقاب عند الإحداثيات ناقص 5.2 ل X ناقص 0.8 ل Y وقم بقياس قيمة المحور Z مرة أخرى.

اضبط قضبان الأذن على مقياس محدد. ضع المثقاب على bregma واضبط ثلاثة إحداثيات على شاشة LCD الرقمية على الصفر. باستخدام الإحداثيات المرجعية ، ضع التدريبات فوق منطقة الاهتمام.

ابدأ التمرين وقم بخفضه تدريجيا باستخدام الذراع الرأسي حتى يخترق المثقاب الجمجمة. تخلص من الحطام والدم باستخدام مسحات القطن. أضف 25 ميكرولترا من مخزن التحميل SDS-PAGE الذي يحتوي على بروموفينول أزرق و 50 ميكرولترا من الماء المقطر المزدوج إلى أنبوب سعة 200 ميكرولتر.

قم بتغطية نافذة الجمجمة بقطعة قطن مبللة بالمحلول الملحي. تحميل 0.3 ميكرولتر من الصبغة في حقنة صغيرة. قم بتوصيل المحقنة والحاقن الدقيق التجسيمي الميكانيكي بالذراع المجسم.

ضع طرف المحقنة في bregma واضبط الإحداثيات على الصفر على شاشة LCD الرقمية. وفقا للإحداثيات المرجعية ، اضبط الإبرة في منطقة الاهتمام. اضبط سرعة الحاقن على 0.1 ميكرولتر في الدقيقة وابدأ الحاقن الصغير الميكانيكي ، مما يوفر 0.3 ميكرولتر من الصبغة في المنطقة المستهدفة.

بعد 10 دقائق ، اسحب الحاقن ببطء.