للبدء ، قم بتلقيح مستعمرة OP50 واحدة في خمسة ملليلتر من LB مع الأمبيسلين والأمفوتريسين B واحتضانها لمدة ست ساعات تقريبا عند 37 درجة مئوية في شاكر بكتيري. بمجرد أن تصبح الثقافة غائمة ، قم بتخفيف ثقافة ما قبل اللقاح ل OP50 بمقدار 1 إلى 2،000 في 250 مل من السل مع الأمبيسلين والجلسرين. ثم نقل الثقافة السائلة OP50 إلى أنبوب طرد مركزي معقم.
جهاز طرد مركزي الأنبوب لمدة 15 دقيقة عند 3،100 G في جهاز طرد مركزي منضدية عند أربع درجات مئوية. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات OP50 في الماء المعقم قبل إعادة الطرد المركزي. بعد الغسيل الثاني ، تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات OP50 في الماء المعقم إلى حجم 50 ملليلتر.
نقله إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر قبل وزنها. جهاز طرد مركزي الأنبوب لمدة 20 دقيقة لحبيبات OP50. في نهاية الطرد المركزي ، قم بإزالة جميع المواد الطافية المتبقية بعناية ، مع ضمان عدم بقاء الماء في الأنبوب.
احسب وزن الحبيبات بطرح وزن أنبوب الطرد المركزي الفارغ من وزن أنبوب الطرد المركزي مع الحبيبات. أعد تعليق حبيبات OP50 تماما في المخزن المؤقت S-complete لتحقيق تركيز 100 ملليغرام لكل ملليلتر. اختبر تعليق OP50 على لوحة أجار للتحقق من أي تلوث.
قم بتخزين تعليق OP50 في مخزن مؤقت S-complete عند أربع درجات مئوية.